Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
Beschrijvingen
Deze kit maakt gebruik van een uniek lysisbuffersysteem dat snel RNA uit gekweekte celmonsters kan vrijmaken voor RT-qPCR-reacties, waardoor het tijdrovende en arbeidsintensieve RNA-zuiveringsproces wordt geëlimineerd.De RNA-template kan in slechts 7 minuten worden verkregen.De 5×Directe RT Mix en 2×Directe qPCR Mix-SYBR-reagentia die door de kit worden geleverd, kunnen snel en effectief realtime kwantitatieve PCR-resultaten verkrijgen.
5×Directe RT Mix en 2×Directe qPCR Mix-SYBR heeft een sterke remmertolerantie en het lysaat van de monsters kan direct als sjabloon voor RT-qPCR worden gebruikt.Deze kit bevat de unieke RNA Foregene reverse transcriptase met hoge affiniteit en Hot D-Taq DNA-polymerase, dNTP's, MgCl2, reactiebuffer, PCR-optimizer en stabilisator.
Specificaties
200×20μlRxns, 1000×20μl Rxns
Kit-componenten
| Deel I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Deel II | DNA-gum |
| 5× Direct RT-mix | |
| 2× Directe qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX-referentiekleurstof | |
| RNase-vrij ddH2O | |
| Instructies | |
Kenmerken&voordelen
■Eenvoudig en effectief: met Cell Direct RT-technologie kunnen RNA-monsters in slechts 7 minuten worden verkregen.
■ De vraag naar monsters is klein, er kunnen slechts 10 cellen worden getest.
■ Hoge verwerkingscapaciteit: het kan snel RNA detecteren in cellen gekweekt in platen met 384, 96, 24, 12, 6 putjes.
■ DNA Eraser kan vrijgegeven genomen snel verwijderen, waardoor de impact op latere experimentele resultaten aanzienlijk wordt verminderd.
■ Geoptimaliseerd RT- en qPCR-systeem maakt de tweestaps RT-PCR reverse transcriptie efficiënter en PCR specifieker en beter bestand tegen RT-qPCR-reactieremmers.
Kit-applicatie
Toepassingsgebied: gekweekte cellen.
- RNA vrijgegeven door monsterlysis: alleen van toepassing op de RT-qPCR-template van deze kit.
- De kit kan voor de volgende doeleinden worden gebruikt: analyse van genexpressie, verificatie van het door siRNA gemedieerde genuitschakelingseffect, screening van geneesmiddelen, enz.
Diagram
Opslag en houdbaarheid
Deel I van deze kit moet worden bewaard bij 4 ℃;Deel II zou bij -20℃ moeten worden bewaard.
Foregene Protease Plus II moet worden bewaard bij 4℃, bevries niet bij -20℃.
Reagens 2×Directe qPCR Mix-SYBR moet worden bewaard bij -20℃in het donker;bij veelvuldig gebruik kan hij ook op 4 worden bewaard℃ voor opslag op korte termijn (gebruik binnen 10 dagen).
Ontwerpprincipes voor real-time PCR-primers
Forward Primer en Reverse Primer
Voor real-time PCR is het ontwerp van de primer erg belangrijk.Primers zijn gerelateerd aan de specificiteit en efficiëntie van PCR-amplificatie en kunnen worden ontworpen met verwijzing naar de volgende principes:
Primerlengte: 18-30bp.
GC-gehalte: 40-60%.
Tm-waarde: Primer-ontwerpsoftware, zoals Primer 5, kan de Tm-waarde van de primer geven.De Tm-waarden van de stroomopwaartse en stroomafwaartse primers moeten zo dicht mogelijk bij elkaar liggen.De Tm-berekeningsformule kan ook worden gebruikt: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Bij het uitvoeren van PCR wordt over het algemeen een temperatuur onder de Tm-waarde van de primer van 5 °C gekozen als de annealingstemperatuur (de overeenkomstige verhoging van de annealingstemperatuur kan de specificiteit van de PCR-reactie verhogen).
Primers en PCR-producten:
De lengte van het PCR-amplificatieproduct van de ontwerpprimer is bij voorkeur 100-150 bp.
Ontwerpprimers in het secundaire structurele gebied van de sjabloon moeten zoveel mogelijk worden vermeden.
Vermijd de vorming van 2 of meer complementaire basen tussen de 3'-uiteinden van stroomopwaartse en stroomafwaartse primers.
Primer 3' eindbasis kan niet aanwezig zijn met 3 extra opeenvolgende G of C.
De primers zelf kunnen geen complementaire structuren hebben, anders wordt er een haarspeldstructuur gevormd die de PCR-amplificatie beïnvloedt.
ATCG moet zo gelijkmatig mogelijk in de primersequentie worden verdeeld en de 3'-terminale base moet worden vermeden als T.
Bijlage 1：Cell Direct RT-qPCR Kit component supplementpakket
1.Oplossing voor cellyse
|
| |||
| Kit-componenten (24-wells lysissysteem / well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| DeelI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA-gum | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT-mix
|
| |
| Kit-componenten (20 ul reactiesysteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT-mix | 800 µl |
| RNase-vrij ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit-componenten (20 ul reactiesysteem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 ton | |
| 2× Directe qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX-referentiekleurstof | 40 ul | 200 µl |
| RNase-vrij ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Handleidingen:
