Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA extractie- en zuiveringskits voor dierlijke weefsels en cellen
Kitbeschrijving:
Extraheer snel en efficiënt totaal RNA van hoge zuiverheid en kwaliteit uit verschillende dierlijke weefsels.
U hoeft zich geen zorgen te maken over RNA-afbraak.Het hele systeem is RNase-vrij
Verwijder effectief DNA met behulp van de DNA-Cleaning Column
DNA verwijderen zonder DNase toe te voegen
Eenvoudig: alle bewerkingen worden uitgevoerd bij kamertemperatuur
Snel: de operatie kan in 30 minuten worden voltooid
Veilig - geen organisch reagens gebruikt
Hoge zuiverheid—OD260/280≈1.8-2.1
Beschrijvingen van kits
50 voorbereidingen, 200 voorbereidingen
Deze kit maakt gebruik van dedraai kolom en formuleontwikkeld door ons bedrijf, dat met hoge efficiëntie zeer zuiver en hoogwaardig totaal RNA uit verschillende dierlijke weefsels kan extraheren. Het biedt een efficiënte DNA-reinigingskolom, die eenvoudig en tijdbesparend genomisch DNA kan scheiden en adsorberen van het supernatant en weefsellysaat;RNA-only Column kan efficiënt RNA binden en kan tegelijkertijd worden verwerkt met een unieke formule Veel monsters.
Het hele systeem is RNase-vrij, zodat het geëxtraheerde RNA niet wordt afgebroken;Buffer RW1, Buffer RW2 bufferwassysteem, zodat het verkregen RNA vrij is van verontreiniging door eiwitten, DNA, ionen en organische verbindingen.
Kit-componenten
| Animal Total RNA-isolatiekit | ||
| Kit-componenten | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RL2 | 15ml | 60ml |
| Buffer RW1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-vrij ddH2O | 10ml | 40ml |
| Kolom met alleen RNA | 50 | 200 |
| DNA-reinigingskolom | 50 | 200 |
| Handleiding | 1 stuk | 1 stuk |
Productinformatie
| Formaat | Draai kolom | Zuiveringscomponent | Foregene kolom, reagens |
| Flux | 1-24 monsters | Tijd per voorbereiding | ~ 30 min (24 voorbeelden) |
| Centrifugeren | Bureau centrifuge | Pyrolyse scheiding | Centrifugale scheiding |
| Steekproef | Dierlijk weefsel;cel | Monsters bedrag | Weefsel: 10-20 mg;Cel:(1-5)×106 |
| Elutie volume | 50-200 μL | Maximaal laadvolume | 850 μL |
Kenmerken&voordelen
■ U hoeft zich geen zorgen te maken over RNA-afbraak;het hele systeem is RNase-vrij
■ Effectief DNA verwijderen met behulp van de DNA-reinigingskolom
■ DNA verwijderen zonder DNase toe te voegen
■ Eenvoudig: alle bewerkingen worden uitgevoerd bij kamertemperatuur
■ Snelle bediening kan in 30 minuten worden voltooid
■ Veilig - geen organisch reagens vereist
■ Hoge zuiverheid -OD260/280≈1.8-2.1
Kit-applicatie
Het is geschikt voor de extractie en zuivering van totaal RNA uit een verscheidenheid aan verse of bevroren dierlijke weefsels of gekweekte cellen.
Productparameters
■ Downstream-toepassingen: synthese van cDNA van de eerste streng, RT-PCR, moleculair klonen, Northern Blot, enz.
■ Monsters: dierlijke weefsels, gekweekte cellen
■ Dosering: weefsels 10-20 mg, cellen (2-5) × 106
■ Maximale DNA-bindingscapaciteit zuiveringskolom: 80 μg
■ Elutievolume: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit behandeld met 20 mg
Verse muizenmonsters, neem 5% gezuiverd totaal RNA 1% agar
Glycogel-elektroforese
1: Milt 2: Nier
3: Lever 4: Hart
Opslag en houdbaarheid
De kit kan 24 maanden worden bewaard bij kamertemperatuur (15-25 ℃) of 2-8 ℃ voor een langere tijd.Buffer RL1 kan 1 maand bij 4 ℃ worden bewaard na toevoeging van (facultatieve) β-mercaptoethanol.
Geciteerde artikelen
1.ALS:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-geladen lipide-achtige nanodeeltjes voor leverbasisbewerking via de optimalisatie van centraal samengesteld ontwerp.Adv.Functiezaak.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ALS:18.187:Hij X, Hong W, Yang J, et al.Spontane apoptose van cellen in therapeutische stamcelbereiding oefent immunomodulerende effecten uit door afgifte van fosfatidylserine.Signaaltransmissie Doel Ther.14 juli 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ALS:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA-modificatie verbetert de oncogene mRNA-translatie en bevordert de progressie van intrahepatisch cholangiocarcinoom.Mol cel.29 juli 2021:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ALS:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-gemedieerde m6A-modificatie vergemakkelijkt leverregeneratie door de homeostase van het endoplasmatisch reticulum te handhaven.Cel Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isolatie kits voor andere voorbeeldbronnenzijn beschikbaar:
Cel, plant, viraal, bloed, enz.
RNA wordt niet geëxtraheerd of de RNA-opbrengsten zijn laag
Er zijn vaak verschillende factoren die de herstelefficiëntie beïnvloeden, zoals: RNA-gehalte van weefselmonster, werkwijze, elutievolume, enz.
1. IJsbad of cryogene (4 °C) centrifugatie werd uitgevoerd tijdens bedrijf.
Aanbeveling: Gedurende het hele proces bij kamertemperatuur (15-25°C) werken, geen ijsbad nemen en centrifugeren bij lage temperaturen.
2. Onjuiste bewaring van het monster of te lange bewaartijd van het monster.
Aanbeveling: bewaar monsters bij -80 °C of vries ze in vloeibare stikstof in en vermijd herhaald gebruik door vriezen en ontdooien;probeer vers weefsel of gekweekte cellen te gebruiken voor RNA-extractie.
3. Onvoldoende monsterlysis.
Aanbeveling: Zorg er bij het homogeniseren van weefsel voor dat het weefsel voldoende gehomogeniseerd is en dat de weefselcellen voldoende gespleten zijn om het vrijkomen van RNA te verklaren.
4. Het eluens is niet correct toegevoegd.
Aanbeveling: Bevestig dat RNase-Free ddH2O wordt druppelsgewijs toegevoegd aan het midden van het zuiveringskolommembraan.
5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan buffer RL2 of buffer RW2.
Aanbeveling: Volg de instructies, voeg de juiste hoeveelheid absolute ethanol toe aan Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat u de kit gebruikt.
6. De dosering van weefselmonsters is niet geschikt.
Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106cellen per 500 μl buffer RL1, omdat overmatig weefselgebruik kan leiden tot verminderde RNA-extractie.
7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.
Aanbeveling: Het elutievolume van de zuiveringskolom is 50-200 μl;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de plaatsingstijd bij kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmd RNase-Free ddH2O, bijv. gedurende 5-10 min.
8. De zuiveringskolom bevat ethanolresidu na wassen met Buffer RW2.
Aanbeveling: Als er ethanolresidu is na het wassen van Buffer RW2, centrifugeren met lege buis gedurende 1 minuut, kan de tijd voor het centrifugeren met lege buis worden verhoogd tot 2 minuten, of de zuiveringskolom kan gedurende 5 minuten op kamertemperatuur worden geplaatst om de resterende ethanol adequaat te verwijderen.
Gezuiverd RNA wordt afgebroken
De kwaliteit van het gezuiverde RNA is gerelateerd aan factoren zoals het behoud van het monster, RNase-besmetting en manipulatie, enz.
1. Weefselmonsters worden niet tijdig bewaard.
Aanbeveling: Als weefselmonsters of cellen na afname niet tijdig worden gebruikt, onmiddellijk cryopreserveren bij -80 °C of vloeibare stikstof.Gebruik waar mogelijk een nieuw genomen weefsel- of celmonster om RNA te extraheren.
2. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van weefselmonsters.
Aanbeveling: Bij het bewaren van weefselmonsters kunt u ze het beste in kleine stukjes snijden om ze te bewaren, en een van de stukjes verwijderen wanneer u ze gebruikt om herhaaldelijk bevriezen en ontdooien van het monster en de afbraak van RNA te voorkomen.
3. RNase wordt geïntroduceerd of het dragen van wegwerphandschoenen, maskers, etc. tijdens de operatie.
Aanbeveling: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in aparte RNA-manipulatiekamers en de tafel wordt voor het experiment afgeruimd.
Draag tijdens het experiment wegwerphandschoenen en -maskers om de RNA-afbraak veroorzaakt door de introductie van RNase te minimaliseren.
4. Reagentia zijn tijdens gebruik verontreinigd met RNase.
Aanbeveling: Vervang door een nieuwe Animal Total RNA Isolation Kit voor gerelateerde experimenten.
5. De centrifugebuisjes, tips enz. die bij RNA-manipulatie worden gebruikt, zijn verontreinigd met RNase.
Aanbeveling: Bevestig dat de centrifugebuisjes, tips, pipetten enz. die worden gebruikt bij RNA-extractie allemaal RNase-vrij zijn.
Gezuiverd verkregen RNA beïnvloedt stroomafwaartse experimenten
RNA gezuiverd door de zuiveringskolom, als de zoutionen, het eiwitgehalte te groot is, zal dit het stroomafwaartse experiment beïnvloeden, zoals: omgekeerde transcriptie, Northern Blot et al.
1. Het geëlueerde RNA heeft zoutionresiduen.
Aanbeveling: Bevestig dat het juiste volume ethanol is toegevoegd aan Buffer RW2 en voer 2 zuiveringskolomwassingen uit met de centrifugaalsnelheid die is aangegeven voor gebruik;als er zoutionresidu is, laat u de zuiveringskolom gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur bufferen met RW2 en voert u centrifugeren uit om de verwijdering van zoutverontreiniging te maximaliseren.
2. Ethanolresidu in geëlueerd RNA.
Aanbeveling: Bevestig dat na het wassen van de buffer RW2, de centrifugeerbewerking met de lege buis wordt uitgevoerd met de aangegeven centrifugeersnelheid, verhoog de tijd van de centrifugeerbewerking met de lege buis tot 2 minuten als er nog ethanolresten zijn, of laat deze gedurende 5 minuten op kamertemperatuur staan na de lege buiscentrifuge om de verwijdering van ethanolresidu te maximaliseren.
