Cel Totaal RNA Isolatiekit Totaal RNA Isolatie Zuiveringskits van cel
Kitbeschrijving:
Uit verschillende gekweekte cellen kan in 11 minuten zeer gezuiverd totaal-RNA van hoge kwaliteit worden verkregen.
RNase-vrij
In werking gesteld bij kamertemperatuur (15-25℃)
Met DNA-reinigingskolom
Hoge RNA-opbrengst
Snel: voltooi de extractie in 11 minuten
Veiligheid: Geen Organische chemische stof
Beschrijving
Deze kit maakt gebruik van de door Foregene ontwikkelde spinkolom en formule, die op efficiënte wijze zeer zuiver en hoogwaardig totaal RNA kan extraheren uit cellen gekweekt in platen met 96, 24, 12 en 6 putjes.
De kit biedt een efficiënte DNA-reinigingskolom, die het supernatant en cellysaat gemakkelijk kan scheiden, genomisch DNA kan binden en verwijderen.De bediening is eenvoudig en tijdbesparend.
TDe kolom met alleen RNA kan efficiënt RNA binden met een unieke formule.Een groot aantal monsters kan tegelijkertijd worden verwerkt.
Kit-componenten
| Kit samenstelling | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| BuffercRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-vrij ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Kolom met alleen RNA | 50 | 200 |
| DNA-reinigingskolom | 50 | 200 |
| Instructie | 1 | 1 |
*Draag handschoenen en neem beschermende maatregelen tijdens de operatie aangezien Buffer cRL1 en Buffer RW1 irriterende chaotrope zouten bevatten.
Kenmerken&voordelen
■ Het hele proces wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur (15-25℃), zonder ijsbad en centrifugeren bij lage temperatuur.
■ De hele kit is RNase-vrij, u hoeft zich geen zorgen te maken over RNA-degradatie.
■ DNA-reinigingskolom bindt specifiek DNA, zodat de kit genomische DNA-verontreiniging kan verwijderen zonder extra DNase toe te voegen.
■ Hoge RNA-opbrengst: kolom met alleen RNA en unieke formule kunnen RNA efficiënt zuiveren.
■ Hoge snelheid: eenvoudig te bedienen en kan in 11 minuten worden voltooid.
■ Veiligheid: er is geen organisch reagens vereist.
■ Hoge kwaliteit: het gezuiverde RNA is van hoge zuiverheid, vrij van eiwitten en andere onzuiverheden en kan verschillende daaropvolgende experimenten doorstaan.
Kit-applicatie
Het is geschikt voor extractie en zuivering van totaal RNA uit gekweekte cellen in platen met 96, 24, 12 en 6 putjes.
Werkstroom
Diagram
Het diagram van de agarosegelbatterij van Cell Total RNA Isolation Kit behandelde de bovenstaande verschillende aantallen cellen, 20 μl volume-elutie, neem 2 μl gezuiverd totaal RNA 1%.
Opslag en houdbaarheid
De kit kan 12 maanden worden bewaard bij kamertemperatuur (15-25 ℃) of 2-8 ℃ voor een langere tijd (24 maanden).
Buffer cRL1 kan 1 maand bij 4 ℃ worden bewaard na toevoeging van 2-hydroxy-1-ethaanthiol (optioneel).
RNA wordt niet geëxtraheerd of de RNA-opbrengsten zijn laag
Er zijn vaak verschillende factoren die de herstelefficiëntie beïnvloeden, zoals: RNA-gehalte van weefselmonster, werkwijze, elutievolume, enz.
1. IJsbad of cryogene (4 °C) centrifugatie werd uitgevoerd tijdens bedrijf.
Aanbeveling: Gedurende het hele proces bij kamertemperatuur (15-25°C) werken, geen ijsbad nemen en centrifugeren bij lage temperaturen.
2. Onjuiste bewaring van het monster of te lange bewaartijd van het monster.
Aanbeveling: bewaar monsters bij -80 °C of vries ze in vloeibare stikstof in en vermijd herhaald gebruik door vriezen en ontdooien;probeer vers weefsel of gekweekte cellen te gebruiken voor RNA-extractie.
3. Onvoldoende monsterlysis.
Aanbeveling: Zorg er bij het homogeniseren van weefsel voor dat het weefsel voldoende gehomogeniseerd is en dat de weefselcellen voldoende gespleten zijn om het vrijkomen van RNA te verklaren.
4. Het eluens is niet correct toegevoegd.
Aanbeveling: Bevestig dat RNase-Free ddH2O wordt druppelsgewijs toegevoegd aan het midden van het zuiveringskolommembraan.
5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan buffer RL2 of buffer RW2.
Aanbeveling: Volg de instructies, voeg de juiste hoeveelheid absolute ethanol toe aan Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat u de kit gebruikt.
6. De dosering van weefselmonsters is niet geschikt.
Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106cellen per 500 μl buffer RL1, omdat overmatig weefselgebruik kan leiden tot verminderde RNA-extractie.
7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.
Aanbeveling: Het elutievolume van de zuiveringskolom is 50-200 μl;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de plaatsingstijd bij kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmd RNase-Free ddH2O, bijv. gedurende 5-10 min.
8. De zuiveringskolom bevat ethanolresidu na wassen met Buffer RW2.
Aanbeveling: Als er ethanolresidu is na het wassen van Buffer RW2, centrifugeren met lege buis gedurende 1 minuut, kan de tijd voor het centrifugeren met lege buis worden verhoogd tot 2 minuten, of de zuiveringskolom kan gedurende 5 minuten op kamertemperatuur worden geplaatst om de resterende ethanol adequaat te verwijderen.
Gezuiverd RNA wordt afgebroken
De kwaliteit van het gezuiverde RNA is gerelateerd aan factoren zoals het behoud van het monster, RNase-besmetting en manipulatie, enz.
1. Weefselmonsters worden niet tijdig bewaard.
Aanbeveling: Als weefselmonsters of cellen na afname niet tijdig worden gebruikt, onmiddellijk cryopreserveren bij -80 °C of vloeibare stikstof.Gebruik waar mogelijk een nieuw genomen weefsel- of celmonster om RNA te extraheren.
2. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van weefselmonsters.
Aanbeveling: Bij het bewaren van weefselmonsters kunt u ze het beste in kleine stukjes snijden om ze te bewaren, en een van de stukjes verwijderen wanneer u ze gebruikt om herhaaldelijk bevriezen en ontdooien van het monster en de afbraak van RNA te voorkomen.
3. RNase wordt geïntroduceerd of het dragen van wegwerphandschoenen, maskers, etc. tijdens de operatie.
Aanbeveling: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in aparte RNA-manipulatiekamers en de tafel wordt voor het experiment afgeruimd.
Draag tijdens het experiment wegwerphandschoenen en -maskers om de RNA-afbraak veroorzaakt door de introductie van RNase te minimaliseren.
4. Reagentia zijn tijdens gebruik verontreinigd met RNase.
Aanbeveling: Vervang door een nieuwe Animal Total RNA Isolation Kit voor gerelateerde experimenten.
5. De centrifugebuisjes, tips enz. die bij RNA-manipulatie worden gebruikt, zijn verontreinigd met RNase.
Aanbeveling: Bevestig dat de centrifugebuisjes, tips, pipetten enz. die worden gebruikt bij RNA-extractie allemaal RNase-vrij zijn.
Gezuiverd verkregen RNA beïnvloedt stroomafwaartse experimenten
RNA gezuiverd door de zuiveringskolom, als de zoutionen, het eiwitgehalte te groot is, zal dit het stroomafwaartse experiment beïnvloeden, zoals: omgekeerde transcriptie, Northern Blot et al.
1. Het geëlueerde RNA heeft zoutionresiduen.
Aanbeveling: Bevestig dat het juiste volume ethanol is toegevoegd aan Buffer RW2 en voer 2 zuiveringskolomwassingen uit met de centrifugaalsnelheid die is aangegeven voor gebruik;als er zoutionresidu is, laat u de zuiveringskolom gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur bufferen met RW2 en voert u centrifugeren uit om de verwijdering van zoutverontreiniging te maximaliseren.
2. Ethanolresidu in geëlueerd RNA.
Aanbeveling: Bevestig dat na het wassen van de buffer RW2 de centrifugeeroperatie met de lege buis wordt uitgevoerd met de aangegeven centrifugeersnelheid, verhoog de tijd van de centrifugeeroperatie met de lege buis tot 2 minuten als er nog ethanolresten zijn, of laat het gedurende 5 m bij kamertemperatuur staan
