Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit voor planten rijk aan polysacchariden en polyfenolen
Kitbeschrijving:
Cat.Nr.RE-05021/05022/05024
Voor zuivering van totaal RNA uit algemene plantenmonsters die hoge polysaccharide- en polyfenolcomponenten bevatten.
Extraheer snel hoogwaardig totaal-RNA uit plantenmonsters met een hoog gehalte aan polysacchariden en polyfenolen.
RNase-vrij met behulp van een DNA-reinigingskolom
Eenvoudig: alle bewerkingen worden uitgevoerd bij kamertemperatuur
Snel: de operatie kan in 30 minuten worden voltooid
Veilig - geen organisch reagens gebruikt 
Specificaties
50 voorbereidingen, 200 voorbereidingen
De kit maakt gebruik van de door Foregene ontwikkelde spinkolom en formule, die op efficiënte wijze zeer zuiver en hoogwaardig totaal RNA kan extraheren uit verschillende plantenweefsels met een hoog gehalte aan polysacchariden of polyfenolen.Het biedt de DNA-reinigingskolom die gemakkelijk genomisch DNA uit het supernatant en weefsellysaat kan verwijderen.Kolom met alleen RNA kan RNA effectief binden.De kit kan een groot aantal monsters tegelijkertijd verwerken.
Het hele systeem bevat geen RNase, dus het gezuiverde RNA wordt niet afgebroken.Buffer PRW1 en Buffer PRW2 kunnen ervoor zorgen dat het verkregen RNA niet wordt verontreinigd door eiwitten, DNA, ionen en organische verbindingen.
Kit-componenten
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-vrij ddH2O, DNA-reinigingskolom |
| Kolom met alleen RNA |
Kenmerken&voordelen
■ Werking bij kamertemperatuur (15-25℃) gedurende het gehele proces, zonder ijsbad en centrifugeren bij lage temperatuur.
■ Complete kit RNase-vrij, u hoeft zich geen zorgen te maken over RNA-degradatie.
■ Bijzonder geschikt voor het zuiveren van RNA uit plantenmonsters van polysacchariden en polyfenolen.
■ DNA-Cleaning Column bindt specifiek aan DNA, zodat de kit genomische DNA-verontreiniging kan verwijderen zonder DNase toe te voegen.
■ Hoge RNA-opbrengst: kolom met alleen RNA en unieke formule kunnen RNA efficiënt zuiveren.
■ Hoge snelheid: eenvoudig te bedienen en kan binnen 30 minuten worden voltooid.
■ Veiligheid: er is geen organisch reagens nodig.
■ Hoge kwaliteit: de gezuiverde RNA-fragmenten zijn van hoge zuiverheid, vrij van eiwitten en andere onzuiverheden, en kunnen voldoen aan verschillende latere experimentele toepassingen.
Productparameters
■ Downstream-toepassingen: synthese van cDNA van de eerste streng, RT-PCR, moleculair klonen, Northern Blot, enz.
■ Monster: verse of bevroren plantenweefsels van polysacchariden en polyfenolen
■ Dosering: 50 mg plantenweefsel
■ Maximale RNA-bindingscapaciteit van de zuiveringskolom: 80 μg
■ Elutievolume: 50-200 μl
Kit-applicatie
Het is geschikt voor de extractie en zuivering van totaal RNA uit verse of bevroren plantenweefselmonsters (vooral vers plantenbladweefsel) met een hoog polysaccharide- en polyfenolgehalte.
Werkstroom
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus verwerkte 50 mg verse bladeren van polysacchariden en polyfenolen en 5% gezuiverd RNA werd getest door middel van elektroforese.
1: Banaan
2: Ginkgo
3: Katoen
4: Granaatappel
Opslag en houdbaarheid
Deze kit is 24 maanden houdbaar onder droge omstandigheden bij kamertemperatuur (15-25℃);als het voor een langere tijd moet worden bewaard, kan het worden bewaard bij 2–8 ℃.
Buffer PSL1 kan gedurende 1 maand bij 4 ℃ worden geplaatst na toevoeging van β-mercapto-ethanol (het wordt aanbevolen om het tegelijkertijd met het experiment toe te voegen).
De kolom verstopt
Nadat de kolom is verstopt, is de RNA-opbrengst verminderd of zelfs onmogelijk om het RNA te zuiveren, en de verkregen RNA-massa is laag.
Analyse van de gemeenschappelijke oorzaak:
1. Voorbeeldpauzes zijn niet grondig.
Monsterbreuk zorgt er niet volledig voor dat de DNA-REINIGINGSKOLOM wordt geblokkeerd, terwijl de RNA-opbrengst en -kwaliteit worden beïnvloed.We raden aan om snel te malen in voldoende vloeibare stikstof wanneer u de monsters brak. Probeer de celwand, het celmembraan en ander weefsel van het monster te verpletteren.Voor plantenmonsters van polyolpolysacchariden raden we u aan om Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS te gebruiken.
2. Bij het opzuigen van het gescheiden monstersupernatant met de DNA-reinigingskolom kan het mogelijke celgefragmenteerde neerslag worden ingeademd.
De genomen celgefragmenteerde sedimenten zullen de RNA-ONLY-kolom veroorzaken die zal worden geblokkeerd wanneer de RNA-adsorptiebewerking wordt uitgevoerd (zie stap 6).We raden u aan dit supernatant zorgvuldig af te zuigen om te voorkomen dat celresten worden opgezogen.
3. Het aanvankelijke bedrag van het monster is te hoog.
Overmatig monstergebruik zal resulteren in onvolledige monsterfragmentatie of onvolledige cellysis door Buffer PSL1, wat resulteert in verstopping van de zuiveringskolom tijdens zuivering.Plant Total RNA Isolation Kit Elk gezuiverd bedrijfsmonster is 50 mg.Voor plantenmonsters van polyolpolysacchariden raden we u aan Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS te proberen.
4. De temperatuur van de centrifuge is te laag.
Het volledige RNA-isolatie- en zuiveringsproces wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur (20-25°C), behalve dat het monsterweefsel wordt gebroken door vloeibare stikstof. De temperatuur van sommige cryogene centrifuges is lager dan 20℃, wat verstopping van de DNA-reinigingskolom en/of de RNA-only-kolom kan veroorzaken.Als dit gebeurt, stelt u de temperatuur van de centrifuge in op 20-25℃, Enzorg ervoor dat het lysismengsel en/of het supernatant met ethanol is voorverwarmd tot 37°C°C.
Er is geen RNA geëxtraheerd of de RNA-opbrengst is laag
Er zijn meestal veel factoren die de herstelefficiëntie beïnvloeden, zoals: monster-RNA-inhoud, werkwijze, het elutievolume, enz.
Analyse van veelvoorkomende oorzaken zoals hieronder:
1. Tijdens de operatie werd een ijsbad of centrifugatie bij lage temperatuur (4°C) uitgevoerd.
Suggestie: werken bij kamertemperatuur (15-25°C) doe tijdens het hele proces geen ijsbad en centrifugatie bij lage temperatuur.
2.Het RNA is afgebroken als gevolg van onjuiste bewaring van het monster of langdurige bewaring van het monster.
Aanbeveling: Vers verzamelde monsters moeten snel worden ingevroren in vloeibare stikstof en vervolgens lange tijd bij -80 °C worden bewaard, vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien van monsters;of laat de monsters onmiddellijk weken in RNA-stabilisator RNAlater-oplossing (dierlijke monsters).
3. Onvoldoende monsterfragmentatie en lysis leiden tot verstopping van de zuiveringskolom.
Suggestie: Zorg er bij het vermalen van het weefsel voor dat het voldoende gemalen is en breng het snel over naar de vooraf bereide Buffer PSL1 (bevestig dat de juiste hoeveelheid β-ME is toegevoegd, zie stap 1 van de procedure).
4. Het eluens is verkeerd toegevoegd.
Suggestie: Zorg ervoor dat RNase-Free ddH2O in het midden van het zuiveringskolommembraan wordt gedruppeld.
5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan buffer PSL2 of buffer PRW2.
Suggestie: Volg de instructies, voeg het juiste volume absolute ethanol toe aan Buffer PSL2 en Buffer PRW2 en meng goed voordat de kit wordt gebruikt.
6.De hoeveelheid weefselmonster is ongepast.
Suggestie: Gebruik 50 mg weefsel per 500 μl Buffer PSL1.Het gebruik van te veel weefsel zal de hoeveelheid geëxtraheerd RNA verminderen en de zuiverheid van het resulterende RNA zal ook afnemen.We raden ten zeerste aan dat de initiële monsterdosering niet hoger is dan 50 mg per RNA-extractiebewerking.
7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.
Suggestie: Het eluensvolume van de zuiveringskolom is 50-200 μl;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de tijd bij kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmde RNase-Free ddH2O, bijvoorbeeld 5-10 min.
8. De zuiveringskolom bevat ethanolresidu na wassen met BufferPRW2.
Suggestie: Als de lege buis gedurende 1 minuut wordt gecentrifugeerd en er is nog steeds ethanol over na het wassen in Buffer PRW2, kunt u de tijd van de lege buiscentrifugeren verhogen tot 2 minuten, of de zuiveringskolom gedurende 5 minuten op kamertemperatuur plaatsen om de resterende ethanol volledig te verwijderen.
9. De kit is verkeerd gebruikt.
Suggestie: Voor plantenmonsters van polyfenolische polysacchariden kan het gebruik van gewone kits zoals Plant Total RNA Isolation Kit mogelijk geen ideale RNA-monsters verkrijgen.We raden u aan Plant Total RNA IsolationKit Plus te gebruiken, dat speciaal is ontworpen voor polyfenolische polysaccharide plantenmonsters.Een kit speciaal ontwikkeld voor het extraheren van RNA uit plantenmonsters van polyfenolen en polysacchariden.
OD260/OD280-waarde is laag
RNA-elutie met ddH2O en gebruikt voor spectrofotometeraflezingen resulteert in lage OD260/OD280-waarden.We raden aan om 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 te gebruiken (in plaats van RNase-Free ddH2O om RNA te elueren) om relatief correcte OD260/OD280-waarden te verkrijgen, zie “RNA Concentration and Purification Assays” op pagina 19.
Het gezuiverde RNA wordt afgebroken
De kwaliteit van gezuiverd RNA is gerelateerd aan factoren zoals het bewaren van monsters, RNase-besmetting en manipulatie.
Analyse van veelvoorkomende oorzaken:
1. Weefselmonsters werden na verzameling niet op tijd bewaard.
Aanbeveling: Als de weefselmonsters na afname niet tijdig worden gebruikt, bewaar ze dan onmiddellijk in vloeibare stikstof bij lage temperatuur of breng ze voor langdurige opslag na snel invriezen in vloeibare stikstof over naar -80°C, of dompel de monsters onmiddellijk onder in RNA-stabilisator RNAlater-oplossing (dierlijke monsters).Probeer voor RNA-extractie vers verzamelde weefselmonsters te gebruiken.
2. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van weefselmonsters.
Suggestie: Bij het bewaren van weefselmonsters kunt u ze het beste in kleine stukjes snijden om ze te bewaren, en een deel ervan verwijderen wanneer u ze gebruikt om de afbraak van RNA als gevolg van herhaaldelijk invriezen en ontdooien van de monsters te voorkomen.
3.RNase wordt geïntroduceerd in de operatiekamer of niet gedragen wegwerphandschoenen, maskers, enz.
Suggestie: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in afzonderlijke RNA-operaties, en de laboratoriumtafel moet vóór het experiment worden schoongemaakt en tijdens het experiment moeten wegwerphandschoenen en -maskers worden gedragen om RNA-degradatie veroorzaakt door de introductie van RNase zoveel mogelijk te voorkomen.
4. Het reagens wordt tijdens gebruik verontreinigd door RNase.
Suggestie: Vervang door een nieuwe serie totaal-RNA-extractiekits voor planten voor gerelateerde experimenten.
5. De centrifugebuisjes en pipetpunten die worden gebruikt voor RNA-manipulatie zijn verontreinigd met RNase.
Suggestie: Zorg ervoor dat de centrifugebuisjes, pipetpunten, pipetten enz. die bij RNA-extractie worden gebruikt allemaal RNase-vrij zijn.
Handleidingen:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Gebruiksaanwijzing
