Geen versterkingssignalen

1. De Taq DNA-polymerase in de kit verliest zijn activiteit als gevolg van onjuiste opslag of vervaldatum van de kit.
Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities van de kit;voeg opnieuw een geschikte hoeveelheid Taq DNA-polymerase toe aan het PCR-systeem of koop een nieuwe real-time PCR-kit voor gerelateerde experimenten.

2. Er zijn veel remmers van Taq DNA-polymerase in de DNA-template.
Suggestie: Herzuiver de sjabloon of verminder de hoeveelheid gebruikte sjabloon.

3.De Mg2+-concentratie is niet geschikt.
Aanbeveling: De Mg2+-concentratie van de 2× Real PCR Mix die wij leveren is 3,5 mM.Voor sommige speciale primers en templates kan de Mg2+-concentratie echter hoger zijn.Daarom kunt u direct MgCl2 toevoegen om de Mg2+-concentratie te optimaliseren.Het wordt aanbevolen om de Mg2+ 0,5 mM elke keer te verhogen voor optimalisatie.

4. De PCR-amplificatieomstandigheden zijn niet geschikt en de primersequentie of concentratie is onjuist.
Suggestie: bevestig de juistheid van de primersequentie en de primer is niet afgebroken;als het versterkingssignaal niet goed is, probeer dan de gloeitemperatuur te verlagen en de primerconcentratie op de juiste manier aan te passen.

5.De hoeveelheid sjabloon is te weinig of te veel.
Aanbeveling: voer de sjabloonlinearisatiegradiëntverdunning uit en selecteer de sjabloonconcentratie met het beste PCR-effect voor real-time PCR-experimenten.

NTC heeft een te hoge fluorescentiewaarde

1.Reagensverontreiniging veroorzaakt tijdens bedrijf.
Aanbeveling: Vervang door nieuwe reagentia voor real-time PCR-experimenten.

2. Verontreiniging vond plaats tijdens de bereiding van het PCR-reactiesysteem.
Aanbeveling: Neem tijdens het gebruik de nodige beschermende maatregelen, zoals: het dragen van latexhandschoenen, het gebruik van een pipetpunt met filter, etc.

3. De primers worden afgebroken en de afbraak van de primers veroorzaakt niet-specifieke amplificatie.
Suggestie: gebruik SDS-PAGE-elektroforese om te detecteren of de primers zijn afgebroken en vervang ze door nieuwe primers voor real-time PCR-experimenten.

Primerdimeer of niet-specifieke amplificatie

1. De Mg2+-concentratie is niet geschikt.
Aanbeveling: De Mg2+-concentratie van de 2× Real PCR EasyTM Mix die wij leveren is 3,5 mM.Voor sommige speciale primers en templates kan de Mg2+-concentratie echter hoger zijn.Daarom kunt u direct MgCl2 toevoegen om de Mg2+-concentratie te optimaliseren.Het wordt aanbevolen om de Mg2+ 0,5 mM elke keer te verhogen voor optimalisatie.

2. De PCR-gloeitemperatuur is te laag.
Suggestie: Verhoog de PCR-gloeitemperatuur elke keer met 1 ℃ of 2 ℃.

3. Het PCR-product is te lang.
Aanbeveling: De lengte van het real-time PCR-product moet tussen 100 en 150 bp liggen, niet meer dan 500 bp.

4. De primers worden afgebroken en de afbraak van de primers zal leiden tot het verschijnen van specifieke amplificatie.
Suggestie: gebruik SDS-PAGE-elektroforese om te detecteren of de primers zijn afgebroken en vervang ze door nieuwe primers voor real-time PCR-experimenten.

5. Het PCR-systeem is onjuist of het systeem is te klein.
Suggestie: Als het PCR-reactiesysteem te klein is, neemt de detectienauwkeurigheid af.Het is het beste om het door het kwantitatieve PCR-instrument aanbevolen reactiesysteem te gebruiken om het real-time PCR-experiment opnieuw uit te voeren.

Slechte herhaalbaarheid van kwantitatieve waarden

1.Het instrument werkt niet goed.
Suggestie: Er kunnen fouten optreden tussen elk PCR-gat van het instrument, wat resulteert in slechte reproduceerbaarheid tijdens temperatuurbeheer of detectie.Controleer volgens de instructies van het overeenkomstige instrument.

2. De zuiverheid van het monster is niet goed.
Aanbeveling: onzuivere monsters zullen leiden tot een slechte reproduceerbaarheid van het experiment, inclusief de zuiverheid van het sjabloon en de primers.Het is het beste om de sjabloon opnieuw te zuiveren en de primers kunnen het beste worden gezuiverd met SDS-PAGE.

3. De voorbereidings- en bewaartijd van het PCR-systeem is te lang.
Suggestie: Gebruik het Real Time PCR-systeem voor PCR-experimenten direct na de voorbereiding en laat het niet te lang liggen.

4. De PCR-amplificatieomstandigheden zijn niet geschikt en de primersequentie of concentratie is onjuist.
Suggestie: bevestig de juistheid van de primersequentie en de primer is niet afgebroken;als het versterkingssignaal niet goed is, probeer dan de gloeitemperatuur te verlagen en de primerconcentratie op de juiste manier aan te passen.

5. Het PCR-systeem is onjuist of het systeem is te klein.
Suggestie: Als het PCR-reactiesysteem te klein is, neemt de detectienauwkeurigheid af.Het is het beste om het door het kwantitatieve PCR-instrument aanbevolen reactiesysteem te gebruiken om het real-time PCR-experiment opnieuw uit te voeren.