(96-wells) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Groen I
Beschrijvingen
De(96-well) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR-kit–SYBR Groen Ibiedteen uniek lysisbuffersysteemto laat snel RNA losuit een gekweekte celmonsters voor RT-qPCR-reacties, waardoor het tijdrovende en arbeidsintensieve wordt geëlimineerdRNA-zuiveringsproces en duurt slechts 7 minuten om de vereiste RNA-template te verkrijgen.De5× Direct RT-mixEn2× Directe qPCR Mix-SYBRgeleverd in de doos kan snel eneffectief real-time kwantitatief verkrijgenPCR-resultaten.
5× Direct RT Mix en 2× Direct qPCR Mix-SYBR hebben een sterke remmertolerantie en kunnen het lysaat van het te testen monster gebruiken als sjabloon voor efficiënte reverse transcriptie en specifieke amplificatie.Het reagens bevat Foregene's unieke reverse transcriptase met hoge affiniteit voor RNA, evenals Hot D-Taq DNA-polymerase, dNTP's, MgCl2 , reactiebuffer, PCR-optimizer en stabilisator, en kan worden gebruikt in combinatie met de lysisbuffer om het monster snel, gemakkelijk en nauwkeurig te detecteren, en het heeft de kenmerken van hoge gevoeligheid, sterke specificiteit en goede stabiliteit.
De kit is gericht op microsysteemlysis van gekweekte cellen met 96 putjes en heeft een goede uniformiteit en consistentie;de kitcomponenten bieden 96 lysisreacties, 96 reverse transcriptiereacties en 96 × 2 qPCR-reacties, die de 96-wells-celplaat voor eenmalig gebruik kunnen ontmoeten, waarbij de vervuiling wordt vermeden die wordt veroorzaakt door herhaaldelijk openen, bevriezen en ontdooien van reagentia en de achteruitgang van reagensprestaties.
Kit-componenten
| Kit samenstelling ( 50 μL lysissysteem/20 μLRT reactiesysteem /20μL qPCR-reactiesysteem) | DRT-03011 | Opmerking | |
| 96T | |||
| DeelI | BufferCL | 5 ml | CelLysis |
| ForegeneProtease plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Deel II | DNAGom | 100 μL | |
| 5× Direct RT-mix | 400 μL | RT | |
| 2× Directe qPCR-mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX-referentiekleurstof | 400µL | ||
| RNase- VrijddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mjaarlijks | 1 deel | 1 portie | |
*: De lysisreagens DNA Eraser is opgenomen in Deel II van de kit;Cell Lysis-, RT- en qPCR-componenten kunnen afzonderlijk worden aangeschaft.
Kenmerken&voordelen
■Eenvoudig en effectief: met Cell Direct RT-technologie kunnen RNA-monsters in slechts 7 minuten worden verkregen.
■ De vraag naar monsters is klein, er kunnen slechts 10 cellen worden getest.
■ Hoge verwerkingscapaciteit: het kan snel RNA detecteren in cellen gekweekt in platen met 384, 96, 24, 12, 6 putjes.
■ DNA Eraser kan vrijgegeven genomen snel verwijderen, waardoor de impact op latere experimentele resultaten aanzienlijk wordt verminderd.
■ Geoptimaliseerd RT- en qPCR-systeem maakt de tweestaps RT-PCR reverse transcriptie efficiënter en PCR specifieker en beter bestand tegen RT-qPCR-reactieremmers.
Kit-applicatie
Toepassingsgebied: gekweekte cellen.
- RNA vrijgegeven door monsterlysis: alleen van toepassing op de RT-qPCR-template van deze kit.
- De kit kan voor de volgende doeleinden worden gebruikt: analyse van genexpressie, verificatie van het door siRNA gemedieerde genuitschakelingseffect, screening van geneesmiddelen, enz.
Opslag en houdbaarheid
Deel I van deze kit moet worden bewaard op 4℃;Deel II zou bij -20℃ moeten worden bewaard.
Foregene Protease Plus II moet worden bewaard bij 4℃, bevries niet bij -20℃.
Reagens 2×Directe qPCR Mix-Taqman moet worden bewaard bij -20℃in het donker;bij veelvuldig gebruik kan hij ook op 4 worden bewaard℃ voor opslag op korte termijn (gebruik binnen 10 dagen).
Ontwerpprincipes voor real-time PCR-primers
Forward Primer en Reverse Primer
Voor real-time PCR is het ontwerp van de primer erg belangrijk.Primers zijn gerelateerd aan de specificiteit en efficiëntie van PCR-amplificatie en kunnen worden ontworpen met verwijzing naar de volgende principes:
- Primerlengte: 18-30bp.
- GC-gehalte: 40-60%.
- Tm-waarde: Primer-ontwerpsoftware, zoals Primer 5, kan de Tm-waarde van de primer geven.De Tm-waarden van de stroomopwaartse en stroomafwaartse primers moeten zo dicht mogelijk bij elkaar liggen.De Tm-berekeningsformule kan ook worden gebruikt: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Bij het uitvoeren van PCR wordt over het algemeen een temperatuur onder de Tm-waarde van de primer van 5 °C gekozen als de annealingstemperatuur (de overeenkomstige verhoging van de annealingstemperatuur kan de specificiteit van de PCR-reactie verhogen).
- Primers en PCR-producten:
- De lengte van het PCR-amplificatieproduct van de ontwerpprimer is bij voorkeur 100-150 bp.
- Ontwerpprimers in het secundaire structurele gebied van de sjabloon moeten zoveel mogelijk worden vermeden.
- Vermijd de vorming van 2 of meer complementaire basen tussen de 3'-uiteinden van stroomopwaartse en stroomafwaartse primers.
- Primer 3' eindbasis kan niet aanwezig zijn met 3 extra opeenvolgende G of C.
- De primers zelf kunnen geen complementaire structuren hebben, anders wordt er een haarspeldstructuur gevormd die de PCR-amplificatie beïnvloedt.
- ATCG moet zo gelijkmatig mogelijk in de primersequentie worden verdeeld en de 3'-terminale base moet worden vermeden als T.
Bijlage1:Cell DirectRT-qPCR Kit componentent supplementenpakket
1. Cellysisoplossing
| Oplossing voor cellyse | |||
| Kit-componenten (24-wells lysissysteem / well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| DeelI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA-gum | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT-mix | |
| Kit-componenten (20 ul reactiesysteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT-mix | 800 µl |
| RNase-vrij ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-mix | ||
| Kit-componenten (20 ul reactiesysteem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 ton | |
| 2× Directe qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX-referentiekleurstof | 40 ul | 200 µl |
| RNase-vrij ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Handleidingen:
