Directe RT-qPCR-kit III
Kitbeschrijving:
◮Directe RT-qPCR-kit, met behulp van Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA-polymerase ontwikkeld door Foregene, met unieke reactiebuffer, maakt deze kit met sterke weerstand en compatibiliteit, en het kan de reactie direct testen met het Foregene Lysis-systeem als sjabloon.Deze kit kan worden gebruikt voor de ontwikkeling van een COVID-19-nucleïnezuurdetectiekit en voor de ontwikkeling van andere pathogene bacteriën voor nucleïnezuurdetectiekits.
Beschrijving
Direct RT-qPCR-kit biedt apart verpakte RT-qPCR-buffer (met Foreasy HS Taq DNA-polymerase gemengd) en zeer efficiënteForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),waardoor het handig is voor het maken van back-endkits en systeemaanpassingen, binnen eenvoudige verificatie.
Directe RT-qPCR-kit, met behulp van Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA-polymerase ontwikkeld door Foregene, met unieke reactiebuffer, maakt deze kit met sterke weerstand en compatibiliteit, en het kan de reactie direct testen met het Foregene Lysis-systeem als sjabloon.Deze kit kan worden gebruikt voor de ontwikkeling van een COVID-19-nucleïnezuurdetectiekit en voor de ontwikkeling van andere pathogene bacteriën voor nucleïnezuurdetectiekits.
Deze kit kan direct het onderdeel van het IVD-product zijn, gemakkelijk en snel te gebruiken.Het heeft alleen eenvoudige verificatie nodig, zonder opnieuw te ontwikkelen.
Specificaties
500T, 50.000T
Kit-componenten
| Inhoud pakket (20 μL reactiesysteem) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 ton | |
| Gemakkelijke Relke keer Transcriptase(200 eenheden/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| 2× Directe qPCRMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instructie | 1 | 1 |
Bedieningsstappen
A: Bereid sjabloon en reagens voor
1. Bereid het voorbereide RNA-sjabloon voor (het wordt aanbevolen om de Foregene Total RNA Isolation Kit-seriekit te gebruiken om het RNA-sjabloon te extraheren en te zuiveren) of het monster van het kraakproduct (het wordt aanbevolen om het Foregene Lysis-systeem te gebruiken), specifieke primers (10 μM) en andere relevante verbruiksartikelen, instrument.
2. Doe de 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O en 20× ROX Reference Dye (indien nodig) in de doos met ijs, laat deze op natuurlijke wijze smelten, en meng voorzichtig.
B: voorbereiding van het RT-qPCR-systeem
Verkrijg de helft van het volume van de reactiebuffer van het reactiesysteem (als het volume van het systeem bijvoorbeeld 20 μL is, moet het 10 μL krijgen 2× Direct RT-qPCR Buffer). Voorovereenkomstige hoeveelheid enzym, dat stellen we voorM-MLV: 10-30 U/20 μL reactiesysteem,TaqDNA-polymerase：1-2 U/20 μL reactiesysteemdit is onze suggestie, je moet het testen en aanpassen), voeg RNA-template, specifieke primers en probes toe en voeg RNase-Free ddH toe2O tot 20 μL.De specifieke voorbereiding van het RT-qPCR-reactiesysteem kan worden verwezen naar de volgende tabel 1.
Tabel 1: voorbereiding van het RT-qPCR-systeem
| Onderdeel | Volume | Laatste concentratie |
| 2 × directe RT-qPCR-buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy omgekeerde transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase | 1-2 U | |
| Voorwaartse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Omgekeerde primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Sjabloon (RNA of lysaat) | X μL | |
| 20 × ROX-referentiekleurstof | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Totale volume | 20 μL |
Opmerking: Forward Primer en Reverse Primer zijn specifieke primers van het doelgen.Het systeem van de qPCR kon worden aangepast volgens praktische experimentele en PCR-modellen.We raden 400nM aan voor de eindconcentratie van de meeste primers.Pas het volume van specifieke primers en probes aan volgens de bereide concentratie en de aanbevolen eindconcentratie.
1*: Selecteer een geschikte eindconcentratie van ROX-referentiekleurstof volgens verschillende kwantitatieve PCR-instrumenten.De optimale ROX-referentiekleurstofconcentratie van gangbare kwantitatieve PCR-instrumenten wordt weergegeven in de volgende tabel:
| Kwantitatieve PCR-instrumenten | Eindconcentratie van ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Stap Een,enz. | 1× (voeg bijvoorbeeld 1μl 20×ROX Reference Dye toe aan 20 μL reactiesysteem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P en Mx4000, enz. | 0,5× (voeg bijvoorbeeld 0,5μl 20×ROX-referentiekleurstof toe aan het reactiesysteem van 20 μL) |
| Roche PCR-instrument, Bio-Rad PCR-instrument, Eppendorf kwantitatief PCR-instrument, enz. | Zonder ROX-referentiekleurstof |
Opslag en houdbaarheid
De kit moet worden bewaard bij -20 ± 5 ℃.Het moet onmiddellijk worden bewaard in een thermostatische koelkast van -20 ℃.De geldigheidsduur is 2 jaar als het in geschikte staat wordt bewaard.
