De lage verhouding van A260/A230 wordt meestal veroorzaakt door onzuiverheden met een maximale absorptiegolflengte van 230 nm.Laten we eens kijken wat deze onzuiverheden bevatten:

• Veelvoorkomende verontreinigende stoffen	Absorptie golflengte	Verhoudingseffect
  Eiwit	~230nm en 280nm	Gelijktijdige reductie van A260/A 280en een260/A 280verhoudingen
  Guanidine zout	220-240 nm	Verklein de A260/A 280verhouding
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm en 270nm	Verklein de A260/A 280verhouding
  EDTA	~230nm	Verklein de A260/A 280verhouding
  Ethanol	230-240 nm	Verklein de A260/A 280verhouding

 
 
 
Absorptiegolflengte en contrastwaarde van veel voorkomende verontreinigende stoffen

Peiwit besmetting
Eiwitvervuiling kan worden beschouwd als de meest voorkomende vervuiling in het extractieproces van nucleïnezuur.Eiwit bestaat tussen de bovenste waterige fase en de onderstebiologischfase.Vervuiling zal tegelijkertijd de verhouding A260/A280 en A260/A230 verminderen, en de verhouding A260/A230 zal duidelijker veranderen dan de verhouding A260/A280.
Tijdens volgendeomgekeerde transcriptieor qPCR-reacties, eiwitresiduen kunnen de enzymfunctie remmen of verstoren.De beste manier om eiwitverontreiniging te voorkomen, is het principe van "liever minder dan meer, vaak een kleine hoeveelheid" in gedachten te houden bij het opzuigen van het supernatant.

2. Guanidinium-verontreiniging
hydrochloride (GuHCl) en guanidinethiocyanaat (GTC) hebben het effect van denaturerende eiwitten, die tijdens het extractieproces van nucleïnezuur snel celmembranen kunnen vernietigen, waardoor eiwitdenaturatie en neerslag ontstaat.De absorptiegolflengte van GuHCl en GTC ligt tussen 220-240 nm, en deresterend guanidiniumzout zal de verhouding A260/A230 verminderen.Hoewel het resterende guanidiniumzout de verhouding zal verminderen,de impact op downstream-experimenten is eigenlijk verwaarloosbaar.

3. Trizol-besmetting
Het hoofdbestanddeel van Trizol is fenol.De belangrijkste functie van fenol is het lyseren van cellen en het vrijmaken van eiwitten en nucleïnezuurstoffen in cellen.Hoewel fenol eiwitten effectief kan denatureren, kan het de RNase-activiteit niet volledig remmen.Daarom worden 8-hydroxychinoline, guanidine-isothiocyanaat, β-mercapto-ethanol enz. aan TRIzol toegevoegd om endogeen en exogeen RNase te remmen.
Bij het extraheren van cellulair RNA kan Trizol de cellen snel lyseren en het nuclease dat uit de cellen vrijkomt remmen, en de resterende Trizol zal de verhouding A260/A230 aanzienlijk verminderen.
Verwerkingsmethode: Bij het centrifugeren moet worden opgemerkt dat de fenol in Trizol gemakkelijk oplosbaar is in de waterfase onder de voorwaarde van 4° en kamertemperatuur.

4. Ethanol residu
Ethanol wordt in het laatste proces gebruikt om het DNA te laten neerslaan terwijl zoutionen worden opgelost die aan het DNA kunnen zijn gebonden.De absorptiegolflengte van de hoogsteabsorptiepiek vanethanol is ook bij 230-240 nm, watzal ook de verhouding A260/A230 verminderen.
De methode om ethanolresidu te vermijden, kan tijdens de laatste elutie twee keer worden herhaald door in te blazenzuurkastgedurende twee minuten om de ethanol volledig te laten verdampen alvorens buffer voor elutie toe te voegen.
Het moet echter bekend zijn dat de verhouding slechts een evaluatie-index is van de RNA-kwaliteit.Als de bovengenoemde bewerkingen strikt worden gereguleerd, zal de afwijking tussen de verhouding en het standaardbereik geen grote invloed hebben op downstream-experimenten.
Gerelateerde producten:
Animal Total RNA-isolatiekit
Plant Total RNA-isolatiekit
Cell Total RNA-isolatiekit
Plant Total RNA Isolatiekit Plus