We zijn er constant van overtuigd dat iemands karakter de hoge kwaliteit van producten bepaalt, de details bepalen de hoge kwaliteit van producten, samen met de REALISTISCHE, EFFICIËNTE EN INNOVATIEVE bemanningsgeest voor nieuwe levering voor nucleïnezuurextractiereagens (serum / plasma en punctie-oplossing), Rna-extractietestkits, met een breed assortiment, topkwaliteit, acceptabele kosten en geweldige hulp, zullen we uw beste zakenpartner worden.We verwelkomen nieuwe en eerdere prospects uit alle lagen van de bevolking om contact met ons op te nemen voor aankomende interacties tussen kleine bedrijven en het bereiken van wederzijdse prestaties!
We geloven constant dat iemands karakter de hoge kwaliteit van producten bepaalt, de details bepalen de hoge kwaliteit van producten, samen met de REALISTISCHE, EFFICIËNTE EN INNOVATIEVE bemanningsgeest voorChina Nucleïnezuurextractiereagens en magnetische parelmethode, Onze producten hebben een uitstekende reputatie genoten vanwege hun goede kwaliteit, concurrerende prijzen en snelle verzending op de internationale markt.Momenteel kijken we er oprecht naar uit om samen te werken met meer overzeese klanten op basis van wederzijdse voordelen.
Handleidingen:Plant Total RNA Isolation Kit Plus Gebruiksaanwijzing

We zijn er constant van overtuigd dat iemands karakter de hoge kwaliteit van producten bepaalt, de details bepalen de hoge kwaliteit van producten, samen met de REALISTISCHE, EFFICIËNTE EN INNOVATIEVE bemanningsgeest voor nieuwe levering voor nucleïnezuurextractiereagens (serum / plasma en punctie-oplossing), Rna-extractietestkits, met een breed assortiment, topkwaliteit, acceptabele kosten en geweldige hulp, zullen we uw beste zakenpartner zijn.We verwelkomen nieuwe en eerdere prospects uit alle lagen van de bevolking om contact met ons op te nemen voor aankomende interacties tussen kleine bedrijven en het bereiken van wederzijdse prestaties!
Nieuwe levering voorChina Nucleïnezuurextractiereagens en magnetische parelmethode, Onze producten hebben een uitstekende reputatie genoten vanwege hun goede kwaliteit, concurrerende prijzen en snelle verzending op de internationale markt.Momenteel kijken we er oprecht naar uit om samen te werken met meer overzeese klanten op basis van wederzijdse voordelen.

De kolom verstopt

Nadat de kolom is verstopt, is de RNA-opbrengst verminderd of zelfs onmogelijk om het RNA te zuiveren, en de verkregen RNA-massa is laag.

Analyse van de gemeenschappelijke oorzaak:

1. Voorbeeldpauzes zijn niet grondig.

Monsterbreuk zorgt er niet volledig voor dat de DNA-REINIGINGSKOLOM wordt geblokkeerd, terwijl de RNA-opbrengst en -kwaliteit worden beïnvloed.We raden aan om snel te malen in voldoende vloeibare stikstof wanneer u de monsters brak. Probeer de celwand, het celmembraan en ander weefsel van het monster te verpletteren.Voor plantenmonsters van polyolpolysacchariden raden we u aan om Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS te gebruiken.

2. Bij het opzuigen van het gescheiden monstersupernatant met de DNA-reinigingskolom kan het mogelijke celgefragmenteerde neerslag worden ingeademd.

De genomen celgefragmenteerde sedimenten zullen de RNA-ONLY-kolom veroorzaken die zal worden geblokkeerd wanneer de RNA-adsorptiebewerking wordt uitgevoerd (zie stap 6).We raden u aan dit supernatant zorgvuldig af te zuigen om te voorkomen dat celresten worden opgezogen.

3. Het aanvankelijke bedrag van het monster is te hoog.

Overmatig monstergebruik zal resulteren in onvolledige monsterfragmentatie of onvolledige cellysis door Buffer PSL1, wat resulteert in verstopping van de zuiveringskolom tijdens zuivering.Plant Total RNA Isolation Kit Elk gezuiverd bedrijfsmonster is 50 mg.Voor plantenmonsters van polyolpolysacchariden raden we u aan Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS te proberen.

4. De temperatuur van de centrifuge is te laag.

Het volledige RNA-isolatie- en zuiveringsproces wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur (20-25°C), behalve dat het monsterweefsel wordt gebroken door vloeibare stikstof. De temperatuur van sommige cryogene centrifuges is lager dan 20℃, wat verstopping van de DNA-reinigingskolom en/of de RNA-only-kolom kan veroorzaken.Als dit gebeurt, stelt u de temperatuur van de centrifuge in op 20-25℃, Enzorg ervoor dat het lysismengsel en/of het supernatant met ethanol is voorverwarmd tot 37°C°C.

Er is geen RNA geëxtraheerd of de RNA-opbrengst is laag

Er zijn meestal veel factoren die de herstelefficiëntie beïnvloeden, zoals: monster-RNA-inhoud, werkwijze, het elutievolume, enz.

Analyse van veelvoorkomende oorzaken zoals hieronder:

1. Tijdens de operatie werd een ijsbad of centrifugatie bij lage temperatuur (4°C) uitgevoerd.

Suggestie: werken bij kamertemperatuur (15-25°C) doe tijdens het hele proces geen ijsbad en centrifugatie bij lage temperatuur.

2.Het RNA is afgebroken als gevolg van onjuiste bewaring van het monster of langdurige bewaring van het monster.

Aanbeveling: Vers verzamelde monsters moeten snel worden ingevroren in vloeibare stikstof en vervolgens lange tijd bij -80 °C worden bewaard, vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien van monsters;of laat de monsters onmiddellijk weken in RNA-stabilisator RNAlater-oplossing (dierlijke monsters).

3. Onvoldoende monsterfragmentatie en lysis leiden tot verstopping van de zuiveringskolom.

Suggestie: Zorg er bij het vermalen van het weefsel voor dat het voldoende gemalen is en breng het snel over naar de vooraf bereide Buffer PSL1 (bevestig dat de juiste hoeveelheid β-ME is toegevoegd, zie stap 1 van de procedure).

4. Het eluens is verkeerd toegevoegd.

Suggestie: Zorg ervoor dat RNase-Free ddH2O in het midden van het zuiveringskolommembraan wordt gedruppeld.

5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan buffer PSL2 of buffer PRW2.

Suggestie: Volg de instructies, voeg het juiste volume absolute ethanol toe aan Buffer PSL2 en Buffer PRW2 en meng goed voordat de kit wordt gebruikt.

6.De hoeveelheid weefselmonster is ongepast.

Suggestie: Gebruik 50 mg weefsel per 500 μl Buffer PSL1.Het gebruik van te veel weefsel zal de hoeveelheid geëxtraheerd RNA verminderen en de zuiverheid van het resulterende RNA zal ook afnemen.We raden ten zeerste aan dat de initiële monsterdosering niet hoger is dan 50 mg per RNA-extractiebewerking.

7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.

Suggestie: Het eluensvolume van de zuiveringskolom is 50-200 μl;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de tijd bij kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmde RNase-Free ddH2O, bijvoorbeeld 5-10 min.

8. De zuiveringskolom bevat ethanolresidu na wassen met BufferPRW2.

Suggestie: Als de lege buis gedurende 1 minuut wordt gecentrifugeerd en er is nog steeds ethanol over na het wassen in Buffer PRW2, kunt u de tijd van de lege buiscentrifugeren verhogen tot 2 minuten, of de zuiveringskolom gedurende 5 minuten op kamertemperatuur plaatsen om de resterende ethanol volledig te verwijderen.

9. De kit is verkeerd gebruikt.

Suggestie: Voor plantenmonsters van polyfenolische polysacchariden kan het gebruik van gewone kits zoals Plant Total RNA Isolation Kit mogelijk geen ideale RNA-monsters verkrijgen.We raden u aan Plant Total RNA IsolationKit Plus te gebruiken, dat speciaal is ontworpen voor polyfenolische polysaccharide plantenmonsters.Een kit speciaal ontwikkeld voor het extraheren van RNA uit plantenmonsters van polyfenolen en polysacchariden.

OD260/OD280-waarde is laag

RNA-elutie met ddH2O en gebruikt voor spectrofotometeraflezingen resulteert in lage OD260/OD280-waarden.We raden aan om 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 te gebruiken (in plaats van RNase-Free ddH2O om RNA te elueren) om relatief correcte OD260/OD280-waarden te verkrijgen, zie “RNA Concentration and Purification Assays” op pagina 19.

Het gezuiverde RNA wordt afgebroken

De kwaliteit van gezuiverd RNA is gerelateerd aan factoren zoals het bewaren van monsters, RNase-besmetting en manipulatie.

Analyse van veelvoorkomende oorzaken:

1. Weefselmonsters werden na verzameling niet op tijd bewaard.

Aanbeveling: Als de weefselmonsters na afname niet tijdig worden gebruikt, bewaar ze dan onmiddellijk in vloeibare stikstof bij lage temperatuur of breng ze voor langdurige opslag na snel invriezen in vloeibare stikstof over naar -80°C, of ​​dompel de monsters onmiddellijk onder in RNA-stabilisator RNAlater-oplossing (dierlijke monsters).Probeer voor RNA-extractie vers verzamelde weefselmonsters te gebruiken.

2. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van weefselmonsters.

Suggestie: Bij het bewaren van weefselmonsters kunt u ze het beste in kleine stukjes snijden om ze te bewaren, en een deel ervan verwijderen wanneer u ze gebruikt om de afbraak van RNA als gevolg van herhaaldelijk invriezen en ontdooien van de monsters te voorkomen.

3.RNase wordt geïntroduceerd in de operatiekamer of niet gedragen wegwerphandschoenen, maskers, enz.

Suggestie: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in afzonderlijke RNA-operaties, en de laboratoriumtafel moet vóór het experiment worden schoongemaakt en tijdens het experiment moeten wegwerphandschoenen en -maskers worden gedragen om RNA-degradatie veroorzaakt door de introductie van RNase zoveel mogelijk te voorkomen.

4. Het reagens wordt tijdens gebruik verontreinigd door RNase.

Suggestie: Vervang door een nieuwe serie totaal-RNA-extractiekits voor planten voor gerelateerde experimenten.

5. De centrifugebuisjes en pipetpunten die worden gebruikt voor RNA-manipulatie zijn verontreinigd met RNase.

Suggestie: Zorg ervoor dat de centrifugebuisjes, pipetpunten, pipetten enz. die bij RNA-extractie worden gebruikt allemaal RNase-vrij zijn.

Handleidingen:

Plant Total RNA Isolation Kit Plus Gebruiksaanwijzing