Stel PCR-experiment-SOP op om het gedrag van experimentpersoneel te standaardiseren.
De onderzoeker houdt zich strikt aan de werkprocedures en minimaliseert de PCR-verontreiniging die kan worden veroorzaakt door menselijke factoren of voorkomt het optreden van verontreiniging.Bovendien moet de experimentator over de bijbehorende professionele kennis en vaardigheden beschikken, waaronder vaardigheid in het bedienen van gerelateerde apparatuur, het verduidelijken van het gehele werkproces, het beheersen van de behandelingsmethoden van verontreiniging en de methoden voor kwaliteitscontrole in het laboratorium, en het correct kunnen interpreteren van de testresultaten.
Zet een standaard PCR-laboratorium op.
Het PCR-laboratorium is in principe verdeeld in vier gebieden, namelijk het gebied voor de voorbereiding van het reagens, het gebied voor de verwerking van monsters, het amplificatiegebied en het analysegebied voor het amplificatieproduct.De eerste twee gebieden zijn pre-amplificatiegebieden en de laatste twee gebieden zijn post-amplificatiegebieden.De voorversterkingszone en de naversterkingszone moeten strikt gescheiden zijn.Experimentele materialen, reagentia, schrijfpapier, pennen, reinigingsmaterialen enz. kunnen alleen van het pre-amplificatiegebied naar het post-amplificatiegebied stromen, dat wil zeggen van het reagensbereidingsgebied → monsterverwerkingsgebied → amplificatiegebied → amplificatieproductanalysegebied, en mogen niet achteruit stromen.De luchtstroom in het laboratorium moet ook van het voorversterkingsgebied naar het naversterkingsgebied stromen en niet terugstromen.Het ideale PCR-laboratoriumontwerp wordt hieronder weergegeven:
Afbeelding A: Ideale PCR-laboratoriumopstellingsmodus met negatieve druk in de bufferruimte
Afbeelding B: Ideale PCR-laboratoriumopstellingsmodus met positieve druk in de bufferruimte
De PCR-laboratoriumopstellingsschema's in afbeelding A en afbeelding B zouden een meer ideale opstellingsmodus moeten zijn, en het laboratorium met voorwaarden kan naar deze modus verwijzen voor ontwerp.Voor gewone laboratoria wordt aanbevolen dat het PCR-amplificatiegebied en het productanalysegebied kunnen worden gescheiden en dat de opening van het deksel zoveel mogelijk moet worden verkleind in het monstervoorbereidingsgebied en het PCR-amplificatiegebied.Onthoud: Het is ten strengste verboden om producten en experimentele benodigdheden in de productanalyseruimte mee te nemen naar de monstervoorbereidingsruimte en de PCR-amplificatieruimte.
Als het laboratorium alleen PCR-detectie en -identificatie uitvoert, wordt aanbevolen om fluorescente kwantitatieve PCR te gebruiken in plaats van conventionele PCR.
Fluorescentie kwantitatieve PCR-detectieresultaten kunnen worden verzameld en geanalyseerd door fluorescentiesignalen, dus het is niet nodig om het deksel te openen voor elektroforese na de reactie, waardoor de PCR-productverontreiniging wordt vermeden die wordt veroorzaakt door het lekken van reactieproducten om aerosolen te vormen.Als u het aantal dopopeningen vergroot tijdens de laadstap van gelelektroforese, is de kans groot dat er aërosolverontreiniging optreedt.Het verdient aanbeveling om de toepassing van kwantitatieve PCR te bevorderen en kwalitatieve PCR geleidelijk te vervangen.
Voor de PCR-reactie wordt het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem gebruikt.
Het systeem gebruikt dUTP in plaats van dTTP.Na de PCR-reactie worden alle PCR-producten (DNA-fragmenten) met dUTP ingebouwd;in de volgende PCR-reactieronde wordt het UNG-enzym dat aan het systeem is toegevoegd gedurende 5 minuten bij 37°C geïncubeerd vóór PCR, dat specifiek alle DNA-fragmenten die dUTP bevatten kan afbreken, en voert vervolgens een PCR-reactie uit.Dit kan de aërosolverontreiniging veroorzaakt door PCR-producten volledig verwijderen.Het effect is weergegeven in onderstaande figuur:
Opmerking: voor de directe PCR-serie kunt u de serieproducten van het anti-PCR-productbesmettingssysteem van Foregene kiezenVoorstellen
Voor laboratoria die grootschalige genotyperingstests uitvoeren, wordt het ten zeerste aanbevolen om het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem te gebruiken voor het testen van reagentia naast de bouw van redelijke laboratoria.
Herinnering: Het gebruik van dit systeem kan de reeds veroorzaakte PCR-productverontreiniging niet verwijderen.Daarom moet het UNG-systeem aan het begin van de relevante test worden gebruikt en moet het UNG-systeem worden gebruikt voor PCR-amplificatie, om besmetting van PCR-producten Vals-positief te voorkomen.
Het wordt aanbevolen om het Direct PCR-UNG-systeem van Foregene te gebruiken bij het uitvoeren van grootschalige tests, zoals:
Plant Leaf Directe PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR-kit-UNG。
Deze serie kits van Foregenekan PCR-detectie niet alleen snel en op grote schaal uitvoeren, maar ook PCR-productbesmetting effectief voorkomen en beheersen.
Posttijd: 19 maart 2021
