Auteurs: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Eenheid: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital Aangesloten bij Tongji University

Op dit moment is het belangrijkste type monster voor de detectie van nucleïnezuur van respiratoire pathogenen een keeluitstrijkje.Er zijn veel soorten veelgebruikte oplossingen voor het bewaren van monsters, die allemaal gekoeld of ingevroren moeten worden voor transport en opslag;Het is moeilijk om het hele proces van lage temperatuur te beheersen tijdens het verzamel- en transportproces, en het is moeilijk om de kwaliteitscontrole te waarborgen voordat monsters worden getest^[1-2].

RNase (RNase) is een endonuclease dat RNA hydrolyseert, voornamelijk door fosfodiësterbindingen tussen nucleotiden te verbreken.Het RNase-molecuul is zeer stabiel, er zijn disulfidebindingen in de structuur en voor zijn activiteit zijn geen tweewaardige kationen vereist, dus RNase wordt niet gemakkelijk gedenatureerd en is gemakkelijk te renatureren, zelfs na hoge temperaturen of het gebruik van denatureringsmiddelen.RNasen zijn onderverdeeld in endogene en exogene.De endogene RNases kunnen tegelijkertijd worden vrijgegeven wanneer cellen worden gescheurd.Daarom is het elimineren van de rol van endogene RNases een zeer kritische stap in het RNA-extractieproces.Exogene RNases zijn wijd verspreid.RNasen komen voor in de lucht, de menselijke huid, het haar en het speeksel, wat belangrijke redenen zijn voor de gemakkelijke afbraak van RNA^[3].

Gegevens opvragen

CANS-CL02-A009 "Toepassing van richtlijnen voor medische laboratoriumkwaliteit en competentieaccreditatie op het gebied van moleculaire diagnose" stelt in de technische vereisten voor dat passende waterkwaliteitsnormen moeten worden geformuleerd in overeenstemming met de toepassing;Wegwerp luchtdichte containers:

RNase/classificatie

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), afgeleid van runderpancreas, is een endoribonuclease dat specifiek het 3'-uiteinde van pyrimidineresiduen op RNA kan aanvallen, waarbij cytosine of uracil wordt gevormd door aangrenzende nucleotiden.Fosfodiësterbinding, het eindproduct van de reactie is een 3'-pyrimidine-nucleotide en een oligonucleotide met een 3'-pyrimidine-nucleotide aan het einde.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) is afgeleid van Aspergillus orjzae, het werkt specifiek op het 3'-terminale fosfaat van guanine en de splitsingsplaats bevindt zich tussen het 3'-fosfaat van guanine en de 5'-hydroxyl van aangrenzende nucleotiden.Het eindproduct van de reactie is 3'-guanylzuur en oligonucleotide-fragmenten met aan het eind 3'-guanylzuur.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) werd voor het eerst ontdekt uit kalfsthymusweefsel en het coderende gen is gekloond in Escherichia coli.Het kan specifiek DNA afbreken: RNA-strengen in RNA-hybride duplexen, resulterend in oligonucleotiden en mononucleotiden met 3'-OH- en 5'-monofosfaatuiteinden, het kan enkel- of dubbelstrengs DNA of RNA niet afbreken.

RNase

Functie en gebruik

Ribonuclease kan de afbraak van ribonucleïnezuur (RNA) katalyseren en kan kunstmatig worden gesynthetiseerd.Medicinale zalf wordt plaatselijk gebruikt om trauma en gewrichtspijn te behandelen.Volgens rapporten kan ribonuclease het metabolisme van de gastheercel veranderen, de virussynthese remmen, de proliferatie van het influenzavirus in vitro remmen en de vorming van vaccinia- en herpesvirus in kippenembryo's remmen.Klinisch gebruik van ribonuclease dagelijkse intramusculaire injectie van 180 mg, gunstig voor de behandeling van epidemische encefalitis, ribonuclease kan de afbraak van ribonucleïnezuur (RNA) katalyseren en kan nu kunstmatig worden gesynthetiseerd.Medicinale zalf wordt plaatselijk gebruikt om trauma en gewrichtspijn te behandelen.Volgens rapporten kan ribonuclease het metabolisme van de gastheercel veranderen, de virussynthese remmen, de proliferatie van het influenzavirus in vitro remmen en de vorming van vaccinia- en herpesvirus in kippenembryo's remmen.Klinisch gebruik van ribonuclease dagelijkse intramusculaire injectie van 180 mg is gunstig voor de behandeling van epidemische encefalitis.

RNase

Definitie van remmer

Definitie van RNase-remmereenheid: De hoeveelheid enzym die nodig is om 50% van de activiteit van 5 ng RNase A te remmen, is één eenheid.

Hoe RNase-remmers werken

Guanidine-isothiocyanaat:

Guanidine-isothiocyanaat is een organische verbinding met de molecuulformule C2H6N4S.Hoofdzakelijk gebruikt in de biologische geneeskunde, chemische reagentia, enz. Guanidine-isothiocyanaat is een eiwitlyserend middel en wordt vaak gebruikt als hoofdbestanddeel van lysisoplossing in moleculaire diagnostische reagentia.Het kan weefsel lyseren, de celstructuur vernietigen en nucleïnezuur scheiden van nucleoproteïne, en heeft een sterke denaturatie tot RNase.Het is momenteel de meest effectieve RNase-remmer.

TRIzol is een nieuw totaal-RNA-extractiereagens dat direct totaal-RNA uit cellen of weefsels kan extraheren.Het bevat stoffen zoals fenol en guanidine-isothiocyanaat, die cellen snel kunnen ontwrichten en door cellen afgegeven nucleasen kunnen remmen.

(Het guanidine-isothiocyanaat is echter gevaarlijk voor de gezondheid van laboratoriumonderzoekers.)

RNasin:

Zure glycoproteïne geëxtraheerd uit rattenlever of humaan blastoderm.Rnasin is een niet-competitieve remmer van RNase, die zich kan binden aan verschillende RNases om ze te inactiveren.

(Meer details: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhoge temperatuur:

Hoge temperatuur is ook een veelgebruikt middel voor eiwitdenaturatie.

Diethylpyrocarbonaat (DEPC):

DEPC is een sterke maar onvolledige RNase-remmer, die de RNase-activiteit kan remmen door te combineren met de aminozuurimidazolring van de RNase-actieve groep om eiwitten te denatureren.

Vanadyl ribonucleoside-complex:

Een complex gevormd door vanadiumoxide-ionen en nucleosiden, dat zich bindt aan RNase in de vorm van overgangsstoffen, die de activiteit van RNase bijna volledig kunnen remmen

ander:

SDS, ureum, diatomeeënaarde, enz. hebben ook een bepaald remmend effect op RNase.

Deskundige beoordelingen

Li Yujie hoofdtechnicus

Directeur van de laboratoriumafdeling van het Jiaozhou-ziekenhuis, het Dongfang-ziekenhuis, verbonden aan de Tongji-universiteit

Om de biologische afbraak van exogeen RNase te voorkomen, moeten tijdens het RNA-extractieproces regelmatig maskers, handschoenen en mutsen worden gedragen en vervangen.Al het glaswerk moet meer dan 2 uur in een droogoven op 200°C gebakken worden.Materialen die worden gebruikt voor het bakken, zoals plastic, moeten worden behandeld met DEPC-water en vervolgens worden gewassen met gedestilleerd water.De reagentia of apparaten die worden gebruikt voor extractie, conservering en identificatie van RNA moeten specifiek zijn voor RNA en er moet een onafhankelijk RNA-operatiegebied worden opgezet.

referenties:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bacteriën en virussen in de nasopharynx onmiddellijk voorafgaand aan het begin van acute lagere luchtweginfecties bij inheemse Australische kinderen [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Afdeling Ziekenhuisinfectiebestrijding van de Chinese vereniging voor preventieve geneeskunde.Richtlijnen voor het verzamelen en inspecteren van klinische microbiële monsters [J].Chinees tijdschrift voor ziekenhuisinfecties, 2018(20):3192-3200.

[3] "Klinische test tienduizend waarom het testvolume van moleculaire biologie"