Plant-DNA-isolatiekit Genomic Plant-DNA-zuiveringskits Reagentiaprotocol
Specificaties
50 bereidingen, 100 bereidingen, 250 bereidingen
Deze kit maakt gebruik van een kolom met alleen DNA die specifiek DNA, Foregene-protease en een uniek buffersysteem kan binden, wat de zuivering van genomisch DNA van planten aanzienlijk vereenvoudigt.Hoogwaardig genomisch DNA kan binnen 30 minuten worden verkregen, waardoor de afbraak van genomisch DNA wordt voorkomen.
Het silicagelmembraan met alleen DNA dat in de spinkolom wordt gebruikt, is het unieke nieuwe materiaal van Foregene, dat effectief en specifiek aan DNA kan binden en de verwijdering van RNA, onzuiverheidseiwitten, ionen, polysacchariden, polyfenolen en andere organische verbindingen kan maximaliseren.
Productcomponenten
| Buffer PL1, Buffer PL2 |
| Buffer PW, Buffer WB, Buffer EB |
| Foregene protease |
| Kolom met alleen DNA |
| Instructies |
Kenmerken&voordelen
■ Geen RNase-besmetting: de kolom met alleen DNA die bij de kit wordt geleverd, maakt het mogelijk om RNA uit genomisch DNA te verwijderen zonder extra RNase tijdens het experiment, waardoor wordt voorkomen dat het laboratorium wordt besmet met exogeen RNase.
■ Hoge snelheid: Foregene Protease heeft een hogere activiteit dan vergelijkbare proteasen en verteert weefselmonsters sneller.
■ Simpel: de genomische DNA-extractie kan in 30 minuten worden voltooid.
■ Handig: de centrifugatie wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur, er is geen centrifugatie bij lage temperatuur van 4 ℃ of ethanolprecipitatie van DNA vereist.
■ Veiligheid: er is geen organisch reagens nodig.
■ Hoge kwaliteit: het gezuiverde genomische DNA heeft grote fragmenten, geen RNA, geen RNase en een extreem laag ionengehalte, en kan voldoen aan de vereisten van verschillende experimenten.
Kit-applicatie
Geschikt voor extractie en zuivering van genomisch DNA uit verse of bevroren plantenweefsels.
Werkstroom
Diagram
Opslag en houdbaarheid
De kit kan 12 maanden worden bewaard bij kamertemperatuur (15-25 ℃) en 2-8 ℃ voor langere tijd.
Foregene Protease Plus-oplossing heeft een unieke formule, die actief is bij langdurige opslag bij kamertemperatuur (3 maanden);zijn activiteit en stabiliteit zullen beter zijn als hij wordt bewaard4℃, dus het wordt aanbevolen om het bij 4℃ te bewaren, vergeet niet om het bij -20℃ te bewaren.
Probleemanalyse gids
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.
Lage opbrengst of geen DNA
Er zijn meestal veel factoren die de opbrengst van genomisch DNA beïnvloeden, waaronder de bron van het monster, de leeftijd van het monster, de opslagomstandigheden van het monster en de werking.
Tijdens de extractie kon geen genomisch DNA worden verkregen
1. De weefselmonsters worden niet goed of te lang bewaard, waardoor het genomisch DNA afbreekt.
Aanbeveling: Bewaar weefselmonsters in vloeibare stikstof of -20°C;probeer nieuw verzamelde monsters te gebruiken voor genomische DNA-extractie.
2. Een te kleine hoeveelheid monster kan ertoe leiden dat het overeenkomstige genomische DNA niet wordt geëxtraheerd.
Suggestie: Voor weefselmonsters die lange tijd zijn opgeslagen of ernstige genomische DNA-afbraak hebben, kan de hoeveelheid weefselmonsters op passende wijze worden verhoogd om aanzienlijk genomisch DNA te extraheren.De hoeveelheid van het monster kan worden bepaald op basis van de DNA-behoeften, maar het verse monster mag niet groter zijn dan 100 mg en het droge monster mag niet groter zijn dan 30 mg.
3. Het monster wordt niet gemalen met vloeibare stikstof of te lang na vloeibare stikstof geplaatst.
Suggestie: Tijdens DNA-extractie moet het monster volledig worden vermalen met vloeibare stikstof om de celwand te breken;breng na het malen het monsterpoeder over naar PL1, voorverwarmd op 65°C zo snel mogelijk (zodra het gemalen poeder is gesmolten, zal het genomische DNA snel beginnen af te breken).
4. Onjuiste opslag van Foregene Protease resulteert in verminderde of geïnactiveerde activiteit.
Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities van Foregene Protease of vervang het door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische hydrolyse.
5. De kit is onjuist of te lang bewaard, waardoor sommige componenten in de kit defect raken.
Aanbeveling: Schaf een nieuwe plantengenomische DNA-extractiekit aan voor gerelateerde operaties.
6. Onjuist gebruik van de kit.
Suggestie: Koop een planten-DNA-isolatiekit speciaal voor monsters voor extractie en zuivering van plantengenomisch DNA.
7. Buffer WB zonder a toe te voegenwatervrij ethanol.
Aanbeveling: Zorg ervoor dat u het juiste volume absolute ethanol toevoegt aan Buffer WB.
8. Het eluens is niet correct op het silicamembraan gedruppeld.
Suggestie: voeg het voorverwarmde eluens toe bij 65℃druppelsgewijs in het midden van het silicagelmembraan en laat het 5 minuten bij kamertemperatuur staan om de elutie-efficiëntie te verhogen.
Extractie om genomisch DNA met een lage opbrengst te verkrijgen
1. Het monster wordt niet goed of te lang bewaard, wat resulteert in de afbraak van genomisch DNA.
Aanbeveling: Bewaar weefselmonsters bij -20℃;probeer nieuw verzamelde weefselmonsters te gebruiken voor genomische DNA-extractie.
2. Als de hoeveelheid weefselmonsters te klein is, zal het geëxtraheerde genomische DNA minder zijn.
Suggestie: Sommige plantenmonsters zijn waterrijk, zoals waterplanten zoals algen enz., de dosering kan passend worden verhoogd of het water kan voor de operatie iets worden uitgedroogd.
3. De monsters zijn na het malen niet grondig gemalen met vloeibare stikstof of hebben te lang bij kamertemperatuur gestaan.
Suggestie: het vermalen van vloeibare stikstof moet voldoende zijn en de celwand van het monster moet zoveel mogelijk worden verbroken;onmiddellijk na het malen moet het monsterpoeder worden overgebracht naar 65℃voorverwarmde Buffer PL1 voor de volgende stap.
4. Gebruik niet de juiste kit.
Aanbeveling: gebruik een speciale plant-DNA-isolatiekit om genomisch DNA van planten te extraheren en te zuiveren.
5. Onjuiste opslag van Foregene Protease resulteert in verminderde of geïnactiveerde activiteit.
Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities van Foregene Protease of vervang het door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische hydrolyse.
6. Probleem met eluens
Aanbeveling: Gebruik Buffer EB voor elutie;bij gebruik van ddH2O of andere eluenten, zorg ervoor dat de pH van het eluens tussen 7,0-8,5 ligt.
7. Het eluens wordt niet correct gedruppeld
Suggestie: voeg de elutiedruppel toe aan het midden van het silicamembraan en laat het gedurende 5 minuten op kamertemperatuur komen om de elutie-efficiëntie te verhogen.
8. Het eluensvolume is te klein
Suggestie: gebruik het eluens voor genomische DNA-elutie volgens de instructies, in ieder geval niet minder dan 100pl.
Geëxtraheerd genomisch DNA met lage zuiverheid
De lage zuiverheid van genomisch DNA zal leiden tot het mislukken of slecht effect van stroomafwaartse experimenten, zoals: het enzym kan niet worden geknipt en het doelgenfragment kan niet worden verkregen door PCR.
1. Diverse eiwitverontreinigingen, RNA-verontreinigingen.
Analyse: Buffer PW werd niet gebruikt om de kolom te wassen;Buffer PW werd niet gebruikt om de kolom met de juiste centrifugatiesnelheid te wassen.
Suggestie: probeer ervoor te zorgen dat er geen neerslag in het supernatant komt wanneer het supernatant door de kolom wordt geleid;zorg ervoor dat u de zuiveringskolom wast met Buffer PW volgens de instructies, en deze stap kan niet worden weggelaten.
2. Verontreiniging door onzuiverheden door ionen.
Analyse: De Buffer WB waskolom werd weggelaten of slechts één keer gewassen, resulterend in resterende ionische verontreiniging.
Aanbeveling: Zorg ervoor dat u twee keer wast met Buffer WB volgens de instructies om resterende ionen zoveel mogelijk te verwijderen.
3. RNase-besmetting.
Analyse: Exogeen RNase wordt aan de buffer toegevoegd;onjuiste wasbewerking in Buffer PW zal resulteren in resterende RNase en downstream RNA-experimentele bewerkingen beïnvloeden, zoals in vitro transcriptie.
Suggestie: Foregene serie nucleïnezuur extractie kits kunnen RNA verwijderen zonder extra RNase, en alle reagentia in Plant DNA Isolation Kit hebben geen RNase nodig;zorg ervoor dat u de zuiveringskolom wast met Buffer PW volgens de instructies, en deze stap kan niet worden weggelaten.
4. Ethanolresten.
Analyse: Na het wassen van de zuiveringskolom met Buffer WB werd geen lege-buiscentrifugering uitgevoerd.
Aanbeveling: Volg de instructies voor een juiste lege buis centrifugeren.
Handleiding:
Installatie-DNA-isolatiekit Gebruiksaanwijzing
