• facebook
  • gelinkt
  • youtube

Tips voor het verbeteren van lijmherstel

1. Verhoog de monsterbelasting tijdens elektroforese.

2. Gebruik vers bereide elektroforesebuffer.

3. Probeer bij het snijden van lijm alleen de lijm met stroken te snijden om het volume van het lijmsnijden te verminderen: heb geen lijm nodig met weinig doelfragmenten, anders heeft dit invloed op de herstelsnelheid.

4. Gebruik na het smelten van twee of meer stukjes lijm een ​​tube, hoe groot het volume ook is, en breng deze over naar dezelfde kolom.

5. De oplossing die in de sol wordt toegevoegd, kan iets meer zijn, wat meer bevorderlijk is voor de binding van DNA aan het membraan, maar over het algemeen niet hoger is dan 750 µl.

6. De sleutel tot gelherstel is om DNA aan de kolom te binden door de zoutconcentratie, zuurgraad (lading) en hydrofobiciteit van de oplossing in de kolom.Daarom, als de pH van de elektroforesebuffer te hoog is, kan 10ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) aan de sol worden toegevoegd;om DNA-moleculen op het membraan beter te onderscheppen, kan 30% isopropanol worden toegevoegd om in de vloeistof te verwarmen na het oplossen van de lijm.

7. Voordat u het eluens toevoegt, laat u de kolom een ​​paar minuten (ongeveer 10 minuten) op kamertemperatuur komen om de ethanol volledig te verdampen.

8. Voeg ten slotte minder eluens toe om het herstelvolume te minimaliseren.Over het algemeen wordt 30-50 μl eluens gebruikt voor elutie (niet te weinig, anders kan het membraan niet nat worden, wat niet bevorderlijk is voor elutie);de elutiedruppeltjes bevinden zich in het midden van het membraan om het aan het membraan gebonden DNA volledig te elueren.

9. Na toevoeging van het eluens kan het worden geëlueerd in een waterbad van 55 graden gedurende 5 minuten of gedurende meer dan 10 minuten in een waterbad van 50 graden worden geplaatst, of worden afgesloten met een parafilm bij 4 graden 's nachts, en vervolgens worden gecentrifugeerd voor herstel de volgende dag, het effect is goed.

10.Voeg het gecentrifugeerde eluaat weer toe aan de adsorptiekolom en centrifugeer opnieuw.

foto8

Gedetailleerde methoden en procedures voor herstel van PCR-producten

1. Gewone rubberrecycling

Als u de lijm wilt herstellen, kunt u het beste een kit gebruiken, wat handig is en een iets hoger herstelpercentage heeft.Als u het echt handmatig moet herstellen, kunt u 3 keer het volume TE toevoegen na het snijden van de lijm.Na smelten in een waterbad worden fenol, fenol/chloroform schoon geëxtraheerd en ethanol neergeslagen.Dat is het.

2. DNA-herstel uit gels met een laag smeltpunt

Zuivering van DNA-fragmenten Voeg TE (10 mmol/l Tris-HCl pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) toe, gelijk aan het volume van de gel, en plaats gedurende 5 minuten in een waterbad van 65°C om de gel volledig op te lossen.

Nadat het op kamertemperatuur was gebracht, werd een gelijke hoeveelheid fenol (verzadigd met TE, TE werd verzegeld in de bovenste laag en de onderste laag fenol werd verwijderd) toegevoegd, en het mengsel werd voorzichtig gemengd (geen mengen vereist), en gecentrifugeerd bij 12.000 rpm gedurende 3 minuten.Herhaal 1-2 keer.

Neem het supernatant, voeg 0,1 volume 3mol/L natriumacetaat (pH 5,2) en 2,5 keer het volume absolute ethanol toe om ethanolprecipitatie uit te voeren.Los het gezuiverde DNA op met een geschikte hoeveelheid TE, meet de inhoud en bereid het voor op gebruik (het kan worden gebruikt voor analyse van de doelgenstructuur, het maken van sondes, enz.).

3. PCR-herstel met goede versterkingsspecificiteit

Als de specificiteit van PCR-amplificatie goed is, is het slechts een eenvoudige zuivering en terugwinning van het PCR-product.U kunt 50 ug/ml proteïnase K toevoegen aan het PCR-product, 37 graden gedurende 1 uur, één keer extraheren met fenol/chloroform, één keer extraheren met chloroform en 0,1 volume supernatant toevoegen.Het natriumacetaat werd gewonnen door precipitatie met 2,5 volumina absolute ethanol.

Gerelateerde producten:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/


Posttijd: 24 september 2022