PCR-methoden en nucleïnezuur-aerosolverontreiniging in nucleïnezuurtestlaboratoria zijn als twee kanten van een medaille.We kunnen er alleen voor kiezen om het te hebben of niet, maar we kunnen niet kiezen of we het willen of uitgeven.

1. Screening van DNA-verwijderaar

Om de ruimtelijke verwijdering van nucleïnezuur-aerosolverontreiniging te bereiken, is het eerst nodig om DNA-verwijderaars uit te filteren die nucleïnezuren in vloeibare toestand kunnen verwijderen.Omdat er niet veel DNA-verwijderaars zijn die echt werken.Zie voor de experimentele methode: DNA-verwijderaar mag geen "geheime hoek" van het laboratorium zijn!

In dit experiment werden 100 kopieën/μL (CT ongeveer 31) ASFV-plasmide en DNA-verwijderaar, gekwantificeerd door digitale PCR, in gelijke volumes gemengd en vervolgens bij kamertemperatuur gedurende respectievelijk 10 min, 20 min en 30 min gereageerd.Na nucleïnezuurextractie werd qPCR-amplificatie uitgevoerd.Een positieve controle gemengd met plasmide en water werd vergeleken.Aangezien het experiment niet tegelijkertijd is voltooid, kan er een zekere afwijking zijn tussen de resultaten, maar dit heeft geen invloed op de conclusie van het experiment.Tot nu toe heb ik 10 commerciële DNA-verwijderingsproducten geëvalueerd.Alleen producten nr. 1, nr. 6 en nr. 8 kunnen plasmide-DNA in vloeibare toestand effectief afbreken.Andere producten hebben bijna geen effect.

Tabel 1 Nucleïnezuurverwijderingseffect van in de handel verkrijgbare DNA-verwijderaar

2. Het DNA-verwijderingseffectexperiment van veelgebruikte desinfectiemiddelen

1. Screening van veelgebruikte desinfectiemiddelen

Er zijn veel soorten desinfectiemiddelen die gewoonlijk in laboratoria worden gebruikt: aldehyden, fenolen, alcoholen, quaternaire ammoniumzouten, peroxiden, chloorpreparaten en zuren en basen.De desinfectie-effecten van deze desinfectiemiddelen op micro-organismen zijn volledig geverifieerd door experimenten, maar er zijn onvoldoende experimentele gegevens over het afbraakeffect van nucleïnezuren.Nucleïnezuurtestlaboratoria hebben een desinfectiemiddel nodig dat niet alleen een goed desinfectie-effect heeft op micro-organismen, maar ook DNA kan afbreken.Uit de testresultaten blijkt dat slechts twee chloorpreparaten van 84 desinfectiemiddel en trichloorisocyanuurzuur en 1 M zoutzuur aan de eisen voldoen.Aangezien 1 M zoutzuur zeer corrosief is, wordt aanbevolen om chloorpreparaten te gebruiken als afvalverwijdering in nucleïnezuurtestlaboratoria.Chloorpreparaten zijn echter corrosief voor metalen en kunnen niet worden gebruikt voor het desinfecteren van instrumenten en apparatuur.

Tabel 2 DNA-verwijderingseffecten van verschillende soorten desinfectiemiddelen

2. De minimale effectieve concentratie van chloorpreparaten

Ontsmettingsmiddelen op chloorbasis hebben een sterk DNA-afbrekend effect, maar vanwege hun metaalcorrosiviteit en irritatie kunnen ze worden gebruikt om de vloer, niet-metalen aanrechtbladen, inweekpunten, centrifugebuizen en andere testitems te reinigen.

Volgens de "New Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": verontreinigende stoffen (bloed, secreties en braaksel van patiënten) beschikbaar chloor 5g/L-10g/L chloorhoudend desinfectiemiddel;vloeren, muren en objectoppervlakken gebruiken beschikbaar chloor 1g/L Chloor desinfectiemiddel: kleding, beddengoed en ander textiel worden eerst gedrenkt in chloordesinfectiemiddel met 0,5 g/L beschikbaar chloor gedurende 30 minuten, en daarna zoals gebruikelijk gereinigd.

Tabel 3 DNA-verwijderingseffect van verschillende concentraties chloordesinfectiemiddel

De testresultaten laten zien dat: wanneer de effectieve chloorconcentratie groter is dan of gelijk is aan 1,2 g/L, het chloorbevattende desinfectiemiddel 100 kopieën/μL plasmide volledig kan afbreken wanneer het gedurende 5 minuten wordt gebruikt.Bij een werking van 10 minuten kan 84 desinfectiemiddel met een effectieve chloorconcentratie groter dan of gelijk aan 0,6 g/L 100 kopieën/μL plasmiden volledig afbreken.

3. Luchtverwijderingsexperiment vervuild door nucleïnezuuraerosol

Hoe de lucht vervuild door nucleïnezuur-aerosolen op te ruimen?De meeste gedachten zijn om een ​​aerosol-verontreinigde omgeving te creëren en deze vervolgens op te ruimen, of om nucleïnezuren op te ruimen na besmetting.Voor mij is een experiment dat niet kan worden herhaald en de resultaten van het experiment niet kwantitatief kunnen worden geanalyseerd zinloos, dus heb ik enkele methoden voor desinfecterende luchtdesinfectie geleend.Zie "GB27948-2020 Algemene vereisten voor luchtdesinfectiemiddelen" en "Technische specificaties voor desinfectie"

1. Testmaterialen

1.1 DNA-verwijderaar: In dit experiment werden twee in de handel verkrijgbare DNA-verwijderaars 6 en 8 in Tabel 1 geselecteerd.

1.2 Testplasmide: Aangezien de CT-waarde van de meeste laboratoriumvervuiling hoger zal zijn dan 30, is de concentratie van het ASFV-genplasmide dat deze keer wordt gebruikt ongeveer 100 kopieën/μL, en de fluorescerende kwantitatieve PCR CT is ongeveer 31,07.Voeg het plasmide toe aan het massaal wattenstaafje en laat aan de lucht drogen.

1.3 Testinstrument: het Bilingkehan KVBOX-desinfectie-instrument, dat vriendelijk wordt ondersteund door Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., heeft uitstekende luchtdesinfectieprestaties met waterstofperoxide-desinfectiemiddel en kan sporen en andere micro-organismen effectief doden.

1.4 Testruimte: een gesloten transfervenster van ongeveer 0,1 kubieke meter.

2. Testmethode

De hoeveelheid desinfectiemiddel die op de desinfectiemachine is ingesteld, is 10 ml en de concentratie is 100 ml/m3, wat veel hoger is dan "GB27948-2020 Algemene vereisten voor luchtdesinfectiemiddelen": bij gebruik van aerosolspray-desinfectie moet de hoeveelheid desinfectiemiddel ≤10 ml/m3 zijn