Laboratoriumtesten beginnen met het verzamelen van monsters en het verzamelen van monsters is het gemakkelijkst over het hoofd te zien.Het belangrijkste voor het verzamelen van monsters is het selecteren van het juiste type monster, het gebruik van geschikte bemonsteringstools en het uitvoeren van redelijk transport en verwerking.

I. Voorbeeldtype

Algemene voorbeeldtypen zijn als volgt:

De bemonsteringsmethode kan verwijzen naar de technische specificaties voor milieumonitoring van het nieuwe coronavirus op de markt voor landbouwhandel (bazaar)”:

1. Neem monsters van keeluitstrijkjes, handen, kleding en andere voorwerpen van beoefenaars: het is vereist om de virusconserveringsoplossing in de virusbemonsteringsbuis te gebruiken en de bemonsterde wattenstaafjes volledig te infiltreren.Het oppervlak van de grond) wordt herhaaldelijk aangebracht en meer dan 3 keer gespoeld.Tegelijkertijd is het noodzakelijk om meerpunts gedistribueerde bemonstering uit te voeren op het oppervlak van het bemonsterde object.

2. Uitstrijkjes van het voedseloppervlak: Voedselmonsters kunnen niet rechtstreeks worden verzameld.Het te verzamelen voedsel moet zorgvuldig worden gescheiden en in een schone bemonsteringszak worden bewaard voordat u uitstrijkjes neemt.Het is vereist om de virusconserveringsoplossing in de virusbemonsteringsbuis te gebruiken, na het volledig doordrenken van het wattenstaafje, om het oppervlak van het te verzamelen voedselmonster herhaaldelijk meer dan 3 keer uit te smeren en te spoelen.Tegelijkertijd is het noodzakelijk om meerpunts gedistribueerde bemonstering op het monsteroppervlak uit te voeren.

3. Rioolmonsters: Selecteer, afhankelijk van de distributie van het drainagesysteem in de markt, 2-3 locaties voor monstername van afvalwater, met de nadruk op de verzameling van interne leidingen, de stroomafwaartse richting van de waterstroom of de verbinding met het gemeentelijke leidingnet.Om een ​​uitstrijkje te verzamelen, dompelt u het in het rioolwater met een wattenstaafje zodat het het rioolwater absorbeert en spoelt u het meer dan 3 keer in de monsterbuis.Gebruik voor het verzamelen van rioolwatermonsters plastic flessen van polyethyleen om 30-500 ml rioolwatermonsters te verzamelen;voor het verzamelen van afvalwater met een volume van meer dan 500 ml kunnen emmers van polyethyleen plastic of speciale verrijkingsapparatuur voor watermonsters op locatie worden gebruikt.Tegelijkertijd is het noodzakelijk om meerpunts gedistribueerde bemonstering uit te voeren voor de locatie van de rioolbemonstering.

4. Diermonsters: Voor levende dieren kunnen monsteruitstrijkjes worden gebruikt voor het afnemen van lichaamsoppervlakuitstrijkjes, orofaryngeale uitstrijkjes en anale uitstrijkjes, en uitwerpselen- of secretiemonsters kunnen ook worden verzameld en dienovereenkomstig op het registratieblad worden genoteerd.Gebruik voor monsters van dieren die zijn gevild enz. wattenstaafjes om monsters van het lichaamsoppervlak en de lichaamsholte te verzamelen.Het is vereist om de virusconserveringsoplossing in de virusbemonsteringsbuis te gebruiken om het bemonsterde wattenstaafje volledig te infiltreren en vervolgens het oppervlak van het te verzamelen voedselmonster opnieuw aan te brengen.Shabu meer dan 3 keer.Tegelijkertijd is het noodzakelijk om meerpunts gedistribueerde bemonstering op het monsteroppervlak uit te voeren.

5. Andere apparaten: containers voor het vervoeren en fokken van dieren zoals kooien of aquaria.Observeer of begrijp eerst de specifieke soorten dieren die in de container zijn opgeslagen en gefokt, en verzamel wattenstaafjes op de binnenwand van de container of vloeibare monsters van de inhoud.

6. Verzamel aerosolmonsters in gebieden waar mensen samenkomen, slecht geventileerde lokale handelsruimten, kantoren en toiletten.

II.Bemonsteringstools
1. Bloedafnamebuis
Als u later nucleïnezuurtesten en antistollingsmonsters moet uitvoeren, wordt aanbevolen om een ​​vacuümbloedvat met EDTA-antistollingsmiddel te gebruiken om bloed te verzamelen;voor serummonsters wordt aanbevolen een vacuümbloedvat zonder antistollingsmiddel te gebruiken.

2. Bemonsteringsstaafje

Het wordt aanbevolen om polypropyleen wattenstaafjes te gebruiken in plaats van calciumalginaat wattenstaafjes of wattenstaafjes met houten stokken, omdat deze stoffen kunnen bevatten die bepaalde virussen inactiveren en PCR-testen belemmeren.Wattenstaafjes met wattenkoppen kunnen niet worden gebruikt, omdat katoenvezels een sterke eiwitadsorptie hebben en niet gemakkelijk in de daaropvolgende conserveringsoplossing worden geëlueerd.

In de "Technische specificaties voor 10-in-1 gemengde verzameling en detectie van nieuwe coronavirus-nucleïnezuren", wordt duidelijk bepaald dat "het bemonsteringsstaafje gemaakt moet zijn van polyester, nylon en andere niet-katoen en niet-calciumalginaatmaterialen, en het handvat moet gemaakt zijn van niet-houten materiaal.Het breekpunt ligt ongeveer 3 cm vanaf de bovenkant van de kop van het wattenstaafje, wat gemakkelijk te breken is.”

De CDC in de Verenigde Staten vermeldde ook: “Gebruik alleen wattenstaafjes van synthetische vezels met plastic of draadschachten.Gebruik geen calciumalginaat-swabs of wattenstaafjes met houten schachten,omdat ze stoffen kunnen bevatten die sommige virussen inactiveren en PCR-testen remmen.

Momenteel wordt veel gebruik gemaakt van een steriel nylon wattenstaafje voor eenmalig gebruik in combinatie met een plastic staafje.Het massaal wattenstaafje heeft een betere wateropname en afgiftesnelheid.Volgens verschillende bemonsteringslocaties heeft de kop van het wattenstaafje ook verschillende maten en vezels.De dikte.”

3. Monster transport conserveringsoplossing

Oplossing voor behoud van virusinactivatie: een geschikte hoeveelheid guanidinezoutconcentratie en een verscheidenheid aan viruslysiscomponenten kunnen het virus direct lyseren om nucleïnezuur vrij te maken, RNase en DNase te inactiveren en de integriteit van nucleïnezuur te waarborgen, dat kan worden gebruikt voor daaropvolgende qPCR-detectie.Het kan niet worden gebruikt voor het kweken en isoleren van virussen.

Virustransport- en conserveringsoplossing: bevat zouten, aminozuren, vitamines, glucose en eiwitten die nodig zijn voor de overleving van het virus, die de activiteit van het virus kunnen behouden.Het kan in de toekomst worden gebruikt voor de nucleïnezuurextractie en detectie van het virus, maar ook voor het kweken en scheiden van het virus.

4. Monsterbewaarbuis en monsterzak

De monsteropslagbuis moet een steriele plastic buis zijn met een schroefdop die geen nucleïnezuur adsorbeert.Elke monsterbuis moet worden afgedekt met een monsterzak om lekkage en verontreiniging van het monster te voorkomen.

III.Storende stoffen in het monster

Interfererende stoffen in PCR-experimenten

1. endogene interferentie

In het lichaamsmonster aanwezige stoffen kunnen de detectie van andere stoffen verstoren.

Bloed:heem (>1 mg/ml), hemine (>0,1 ng/μl), triglyceriden, IgG, enz.;

Urine:Ureum (20 mM);

Kruk:plantaardige polysacchariden, cholaat;

Zakdoek:protease, collageen;

Melk: protease, calciumion;

Drugs: antibiotica, antivirale middelen, hormonen, enz.

ander.

2. exogene interferentie

Het is afkomstig van stoffen die de detectie van andere stoffen in vitro kunnen verstoren.Monsteradditieven en stoffen waarmee contact kan worden opgenomen tijdens monsterverzameling en -verwerking:

Benodigdheden testen: serumscheidingsgel, monsterverzamelcontainer en rubberen stop, katheter, katheterspoelvloeistof, handschoenpoeder, enz.

Antistollingsmiddel: heparine (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), enz.;

Organische oplosmiddelen: isopropanol (>0,1 IU/ml), betaïne, dimethylsulfoxide, formamide, glycerine, PEG, enz.;

Ontsmettingsmiddelen: alcoholen (ethanol>1%), aldehyden, fenolen (fenol>0,2%), peroxiden, sterke zuren (HCL), sterke basen (NaOH), enz.;

Wasmiddel:veiligheidsinformatieblad (>0,005%);

Bodem: Humus

Kleurstof: Indigo

ander.

Onder feitelijke bemonsteringsomstandigheden buiten, zoals het verzamelen van omgevingsmonsters, kunnen de monsters een verscheidenheid aan storende stoffen bevatten en is de samenstelling van storende stoffen op elke locatie anders, waardoor PCR-interferentie-experimenten moeten worden uitgevoerd volgens lokale omstandigheden.

IV.Voorbeeld van opslag- en transportomstandigheden

Vers afgenomen klinische monsters moeten binnen 2 tot 4 uur na afname bij 2°C tot 8°C naar het laboratorium worden gestuurd.Bewaar bij 4 ℃ binnen 24 uur.Specimens die worden gebruikt voor virusisolatie en detectie van nucleïnezuren moeten zo snel mogelijk worden getest.Monsters die binnen 24 uur kunnen worden getest, kunnen worden bewaard bij 4°C;specimens die niet binnen 24 uur kunnen worden gedetecteerd, moeten worden bewaard bij -70°C of lager (zo niet - Bewaren bij 70°C in een koelkast bij -20°C).

Samenvatting:Het gestandaardiseerd verzamelen, transporteren en opslaan van monsters is essentieel voor latere testen.De fout-negatieven van veel laboratoriumtests worden veroorzaakt door onjuiste verzameling, transport en opslag van monsters die leiden tot afbraak van viraal nucleïnezuur.Veel laboratoria negeren echter nog steeds het belang van bemonstering.Ik hoop dat dit artikel ieders aandacht voor steekproeven kan wekken en meer wetenschappelijke en redelijke steekproeven kan maken!

Gerelateerd product:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) - Voor detectie van mutanten uit Brazilië, Zuid-Afrika en het VK