Leiding

Lang niet-coderend RNA, lncRNA is een niet-coderend RNA met een lengte van meer dan 200 nucleotiden, meestal tussen 200-100.000 nt.lncRNA reguleert genexpressie op epigenetisch, transcriptie- en post-transcriptioneel niveau, en neemt deel aan X-chromosoomuitschakeling, genoomimprinting en chromatinemodificatie, transcriptieactivering, transcriptie-interferentie, nucleair transport, celcyclusregulatie, celdifferentiatieregulatie en dosiscompensatie-effecten (doseringscompensatie-effect) en vele andere belangrijke regulatieprocessen zijn nauw verwant aan het ontstaan, de ontwikkeling en de preventie van ziekten bij de mens, en zijn momenteel een van de hotspots op het gebied van de biogeneeskunde.

01  Typen en kenmerken van LncRNA

lncRNA is verdeeld in vele typen volgens de verschillende bronnen van zijn vorming, zoals weergegeven in de bovenstaande afbeelding.Heeft de volgende kenmerken:

1. lncRNA's zijn meestal langer, met dynamische expressie en verschillende splitsingsmethoden tijdens differentiatie
2. In vergelijking met coderende genen heeft lncRNA meestal een lager expressieniveau
3. De meeste lncRNA's hebben duidelijke temporele en ruimtelijke expressiespecificiteit in het proces van weefseldifferentiatie en -ontwikkeling
4. Er zijn karakteristieke uitingen in tumoren en andere ziekten
5. De subcellulaire locaties van lncRNA zijn divers
6. De reeks heeft een lage conservering, maar de functie heeft een zekere mate van conservering, enz.

02 Veelgestelde vragen over LncRNA omgekeerde transcriptie

Vanwege het lage gehalte aan lncRNA in cellen, de lange lengte en de structuur op hoog niveau, heeft dergelijk RNA vaak complexe structuren zoals stamlussen of haarspelden, en RT-qPCR is vatbaar voor problemen van mislukte reverse transcriptie of lage efficiëntie.

03 LncRNA reverse transcriptie-oplossing

In de centrale regel wordt het proces van RNA-virussen die hun eigen reverse transcriptase gebruiken om DNA te synthetiseren met behulp van RNA als sjabloon, reverse transcriptie genoemd.Het proces waarbij reverse transcriptase van het RNA-virus wordt gebruikt om cDNA-template in vitro te synthetiseren, wordt reverse transcriptie genoemd.De belangrijkste elementen in het reverse transcriptiesysteem: RNA-template, reverse transcriptase, primers en andere componenten.

1.RNA-sjabloon

De invloed van RNA-template op reverse transcriptie wordt weerspiegeld in de structuur, zuiverheid en integriteit ervan.Hoe hoger de zuiverheid en integriteit van het geëxtraheerde RNA, hoe hoger de efficiëntie van reverse transcriptie en hoe nauwkeuriger de daaropvolgende kwantitatieve resultaten.Het RNA dat wordt gezuiverd door veelgebruikte RNA-extractiereagentia bevat vaak residuen van alcohol en guanidinezouten, die een sterk remmend effect hebben op de meeste reverse transcriptase.

2. Omgekeerde transcriptase

Reverse transcriptase heeft een belangrijke invloed op het gehele reverse transcriptiesysteem.De geschikte temperatuur voor de reverse transcriptase die in de meeste laboratoria wordt gebruikt, is over het algemeen 42°C.In feite vereist het openen van de RNA-structuur op hoog niveau een hogere temperatuur en zijn de vereisten voor reverse transcriptase hoger.

3.Primer

Omgekeerde transcriptieprimers omvatten genspecifieke primers, willekeurige primers en Oligo dT-primers.De meeste lncRNA's bevatten geen polyA-staarten en het is belangrijk om de willekeurige primers goed te matchen met Oligo dT.

4. Andere componenten

Gezien het feit dat RNA bijzonder gemakkelijk afbreekbaar is, kan de introductie van componenten in het reverse transcriptiesysteem worden geminimaliseerd, wat de invoer van RNase effectief kan voorkomen en een soepel verloop van reverse transcriptie kan garanderen.

Foregeenverkrijgt van RNA-template, reverse transcriptie naar qPCR

Begeleid uw lncRNA-detectie volledig

Dierlijk totaal RNA IoplossingKit (met gDNA-verwijderingskolom)

Cel Totaal RNA IoplossingKit (met gDNA-verwijderingskolom)

Lnc-RT HeroTM I (met gDNase) (Super Premix voor eerste-streng cDNA-synthese van lncRNA)

Realtime PCR EasyTM-SYBR Groen I

Avoordelen ofRNA-extractie:

De kit maakt gebruik van de derde generatie RNA-extractietechnologie, het is niet nodig om DNase te gebruiken.

11 minuten van gekweekte cellen met 96, 24, 12 en 6 putjes, zeer efficiënte extractie van gDNA-vrij, zeer zuiver, hoogwaardig totaal cel-RNA.

Voordelen van lncRNA reverse transcriptie:

Een reverse transcriptiesysteem speciaal ontwikkeld voor LncRNA om genomische DNA-verontreiniging snel te verwijderen.

Het reverse transcriptiesysteem heeft een hoge thermische stabiliteit en heeft nog steeds goede reverse transcriptieprestaties bij 50°C.

Sjablonen met een hoog GC-gehalte en een complexe secundaire structuur kunnen met hoge efficiëntie worden teruggedraaid.

Voordelenof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase heeft een hogere amplificatie-efficiëntie, hogere amplificatiegevoeligheid en hogere amplificatiespecificiteit

De geoptimaliseerde Real PCR Easy Mix zorgt ervoor dat SYBR Green I een hogere detectiegevoeligheid heeft, en de fluorescentie-intensiteit is 3-5 keer die van vergelijkbare producten, wat kan voldoen aan de behoeften van verschillende soorten kwantitatieve fluorescentie-experimenten.