SOP-systeem bouwen

Stel PCR-experiment-SOP op om het gedrag van experimentpersoneel te standaardiseren.

De onderzoekers houden zich strikt aan de werkprocedures en minimaliseren de PCR-verontreiniging die kan worden veroorzaakt door menselijke factoren of voorkomen het optreden van vervuiling tijdens de operatie.Bovendien moet de experimentator over de bijbehorende professionele kennis en vaardigheden beschikken, waaronder vaardigheid in het bedienen van gerelateerde apparatuur, het verduidelijken van het gehele werkproces, het beheersen van de behandelingsmethoden van verontreiniging en de methoden voor kwaliteitscontrole in het laboratorium, en het correct kunnen interpreteren van de testresultaten.

Gebouw Standaard PCR-laboratorium

Het PCR-laboratorium is in principe verdeeld in vier gebieden, namelijk het gebied voor de bereiding van reagentia, het gebied voor de verwerking van monsters, het amplificatiegebied en het analysegebied voor het amplificatieproduct.De eerste twee gebieden zijn pre-amplificatiegebieden en de laatste twee gebieden zijn post-amplificatiegebieden.De voorversterkingszone en de naversterkingszone moeten strikt gescheiden zijn.Experimentele materialen, reagentia, schrijfpapier, pennen, reinigingsmaterialen enz. kunnen alleen van het vooramplificatiegebied naar het postamplificatiegebied stromen, dat wil zeggen van het reagensbereidingsgebied, het monsterverwerkingsgebied, het amplificatiegebied en het amplificatieproductanalysegebied, en mogen niet in de omgekeerde richting stromen.De luchtstroom in het laboratorium moet ook van het voorversterkingsgebied naar het naversterkingsgebied stromen, niet in omgekeerde richting.

Verminder experimentele stappen

Als het laboratorium alleen PCR-detectie en -identificatie uitvoert, wordt aanbevolen om fluorescente kwantitatieve PCR te gebruiken in plaats van conventionele PCR.

Fluorescentie kwantitatieve PCR-detectieresultaten kunnen worden verzameld en geanalyseerd door fluorescentiesignalen, dus het is niet nodig om het deksel te openen voor elektroforese na de reactie, wat de verontreiniging van PCR-producten veroorzaakt door het lekken van reactieproducten om aerosolen te vormen, vermijdt.Als u het aantal dopopeningen vergroot tijdens de laadstap van gelelektroforese, is de kans groot dat er aërosolverontreiniging optreedt.Het verdient aanbeveling om de toepassing van kwantitatieve PCR te bevorderen en kwalitatieve PCR geleidelijk te vervangen.

Adopteer UNG anti-vervuilingssysteem

Voor de PCR-reactie wordt het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem gebruikt.

Het systeem gebruikt dUTP in plaats van dTTP.Na de PCR-reactie worden alle PCR-producten (DNA-fragmenten) met dUTP ingebouwd;in de volgende PCR-reactieronde wordt het aan het systeem toegevoegde UNG-enzym 5 minuten bij 37°C geïncubeerd vóór PCR, wat specifiek kan zijn. Degradeer alle DNA-fragmenten die dUTP bevatten en voer vervolgens een PCR-reactie uit.Dit kan de aërosolverontreiniging veroorzaakt door PCR-producten volledig verwijderen.Het effect is weergegeven in onderstaande figuur:

Opmerking: voor de directe PCR-serie kunt u de serieproducten van het anti-PCR-productvervuilingssysteem van FJ Biotech kiezen

Voorstellen

Voor laboratoria die grootschalige genotyperingstests uitvoeren, wordt het ten zeerste aanbevolen om het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem te gebruiken voor het testen van reagentia naast de bouw van redelijke laboratoria.

Herinnering: Het gebruik van dit systeem kan de reeds veroorzaakte PCR-productverontreiniging niet verwijderen.Daarom moet het UNG-systeem aan het begin van de relevante test worden gebruikt en moet het UNG-systeem altijd worden gebruikt voor PCR-amplificatie, om besmetting van PCR-producten te voorkomen.Vals positief.

Het wordt aanbevolen om het Direct PCR-UNG-systeem van Forge Biotech te gebruiken bij het uitvoeren van grootschalige tests, zoals: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR-kit-UNG。

Deze serie kits van Foregene kan niet alleen snel en op grote schaal PCR-detectie uitvoeren, maar ook PCR-productverontreiniging effectief voorkomen en beheersen.