• facebook
  • gelinkt
  • youtube

1: Vervang de experimentele benodigdheden op tijd

nieuws812 (1) 

Stel (NTC) negatieve controle in en herhaal dit vele malen.Zodra blijkt dat er PCR-productverontreiniging in het laboratorium is, vervang dan tijdig alle experimentele benodigdheden.Zoals: de primers opnieuw verdunnen en voorbereiden, de pipetpunt, EP-buis, ddH2O, enz. opnieuw steriliseren, vervangen door een nieuwe pipet en tijdelijk andere laboratoria lenen om PCR-experimenten uit te voeren.Het verontreinigde laboratorium wordt geventileerd en bestraald met ultraviolette stralen totdat de PCR-productverontreiniging is geëlimineerd alvorens verder te gaan met het experiment.

2: Verleng de UV-blootstellingstijd

nieuws812 (2)

Het is vermeldenswaard dat om DNA-verontreiniging te verwijderen, reguliere ultraviolette straling met 2 uur moet worden verlengd dan normaal.Toch is het effect van UV-straling op het verwijderen van kleine fragmenten (minder dan 200 bp) van DNA-verontreiniging nog steeds niet goed.

Ultraviolette golflengte (nm) is over het algemeen 254/300 nm, en het is voldoende om gedurende 30 minuten te bestralen.Opgemerkt moet worden dat bij het kiezen van UV om de verontreiniging van resterende PCR-producten te elimineren, rekening moet worden gehouden met de lengte van het PCR-product en de verdeling van basen in de productvolgorde.UV-bestraling is alleen effectief voor lange fragmenten van meer dan 500 bp en heeft weinig effect op korte fragmenten.

Tijdens UV-bestraling zullen de pyrimidinebasen in het PCR-product dimeren vormen.Deze dimeren kunnen de verlenging beëindigen, maar niet alle pyrimidines in de DNA-keten kunnen dimeren vormen, en UV-straling kan de dimeren ook breken..De mate van dimeervorming hangt af van de UV-golflengte, het type pyrimidinedimeer en de sequentie van nucleotiden grenzend aan de dimeerplaats.Als de met PCR geamplificeerde fragmenten klein zijn, wordt daarom aanbevolen om het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem te gebruiken.

3: Veelgebruikte aaseters voor DNA-verontreiniging

nieuws812 (3)

Aerosolen worden gemakkelijk gegenereerd wanneer pipetten worden toegevoegd, wat moeilijk te vermijden is, en het zal snel bezinken.Daarom is het ongetwijfeld een goede keuze om regelmatig speciale DNA-vervuilingsvangers te gebruiken om de verspreiding van DNA-vervuiling tegen te gaan.

4: Gebruik het UNG-systeem tegen vervuiling

nieuws812 (4)

Nadat de PCR-productverontreiniging is verwijderd, kan het testlaboratorium het UNG anti-PCR-productverontreinigingssysteem gebruiken om PCR-productverontreiniging te voorkomen.In algemene laboratoria kunt u eenvoudige experimentele partities uitvoeren, het PCR-productgebied strikt scheiden van andere gebieden, bepaalde laboratoriumregels en -voorschriften opstellen en relevante training geven om het optreden van PCR-productbesmetting te voorkomen.

Aanbevelingen: Het opzetten van een redelijk PCR-laboratorium, het onderhouden van een goede PCR-omgeving, het formuleren van standaard PCR-werkprocedures en het cultiveren van een rigoureus operationeel bewustzijn van onderzoekers zijn de sleutels tot het voorkomen of verminderen van de vervuiling van PCR-experimenten.


Posttijd: 12 aug. 2021