1: Vervang de experimentele benodigdheden op tijd
Stel (NTC) negatieve controle in en herhaal dit vele malen.Zodra blijkt dat er PCR-productverontreiniging in het laboratorium is, vervang dan tijdig alle experimentele benodigdheden.Zoals: de primers opnieuw verdunnen en voorbereiden, de pipetpunt, EP-buis, ddH2O, enz. opnieuw steriliseren, vervangen door een nieuwe pipet en tijdelijk andere laboratoria lenen om PCR-experimenten uit te voeren.Het verontreinigde laboratorium wordt geventileerd en bestraald met ultraviolette stralen totdat de PCR-productverontreiniging is geëlimineerd alvorens verder te gaan met het experiment.
2: Verleng de UV-blootstellingstijd
Het is vermeldenswaard dat om DNA-verontreiniging te verwijderen, reguliere ultraviolette straling met 2 uur moet worden verlengd dan normaal.Toch is het effect van UV-straling op het verwijderen van kleine fragmenten (minder dan 200 bp) van DNA-verontreiniging nog steeds niet goed.
Ultraviolette golflengte (nm) is over het algemeen 254/300 nm, en het is voldoende om gedurende 30 minuten te bestralen.Opgemerkt moet worden dat bij het kiezen van UV om de verontreiniging van resterende PCR-producten te elimineren, rekening moet worden gehouden met de lengte van het PCR-product en de verdeling van basen in de productvolgorde.UV-bestraling is alleen effectief voor lange fragmenten van meer dan 500 bp en heeft weinig effect op korte fragmenten.
Tijdens UV-bestraling zullen de pyrimidinebasen in het PCR-product dimeren vormen.Deze dimeren kunnen de verlenging beëindigen, maar niet alle pyrimidines in de DNA-keten kunnen dimeren vormen, en UV-straling kan de dimeren ook breken..De mate van dimeervorming hangt af van de UV-golflengte, het type pyrimidinedimeer en de sequentie van nucleotiden grenzend aan de dimeerplaats.Als de met PCR geamplificeerde fragmenten klein zijn, wordt daarom aanbevolen om het UNG anti-PCR-productbesmettingssysteem te gebruiken.
3: Veelgebruikte aaseters voor DNA-verontreiniging
Aerosolen worden gemakkelijk gegenereerd wanneer pipetten worden toegevoegd, wat moeilijk te vermijden is, en het zal snel bezinken.Daarom is het ongetwijfeld een goede keuze om regelmatig speciale DNA-vervuilingsvangers te gebruiken om de verspreiding van DNA-vervuiling tegen te gaan.
4: Gebruik het UNG-systeem tegen vervuiling
Nadat de PCR-productverontreiniging is verwijderd, kan het testlaboratorium het UNG anti-PCR-productverontreinigingssysteem gebruiken om PCR-productverontreiniging te voorkomen.In algemene laboratoria kunt u eenvoudige experimentele partities uitvoeren, het PCR-productgebied strikt scheiden van andere gebieden, bepaalde laboratoriumregels en -voorschriften opstellen en relevante training geven om het optreden van PCR-productbesmetting te voorkomen.
Aanbevelingen: Het opzetten van een redelijk PCR-laboratorium, het onderhouden van een goede PCR-omgeving, het formuleren van standaard PCR-werkprocedures en het cultiveren van een rigoureus operationeel bewustzijn van onderzoekers zijn de sleutels tot het voorkomen of verminderen van de vervuiling van PCR-experimenten.
Posttijd: 12 aug. 2021