W:Brother, de reverse transcriptie is voltooid, en tot slot de laatste stap – fluorescerende kwantitatieve PCR!Hé, broer, wat is real-time kwantitatieve PCR?
M:PCR weet je altijd, toch?
W: Weet je, PCR is de polymerasekettingreactie, en het is een technologie die het DNA vergroot!
M:Het is bijna... Het is een technische methode om de doelwitsequentie tot meer dan een miljoen keer te amplificeren door middel van specifieke primers, maar dit geeft alleen de aan- of afwezigheid van de doelwitsequentie aan en kan niet de hoeveelheid van de initiële sjabloon bepalen.Fluorescentie kwantitatieve PCR is een technische methode die is ontwikkeld om dit probleem op te lossen.Realtime PCR en kwantiteits-PCR (qPCR) verwijzen er over het algemeen naar.
W: Het verschil met gewone PCR ligt in fluorescentiekwantificering?
M: Ja, dat wil zeggen, in de verlengingsfase van elke PCR-cyclus wordt de fluorescentiesignaalintensiteit gedetecteerd en kan de initiële sjabloonhoeveelheid worden berekend op basis van de verandering van de signaalintensiteit.
W: Het voelt zo ingewikkeld!Moet ik dit zelf berekenen?
M:Dit vereist dat je langzaam leert, het is het beste om het principe te begrijpen.Nu kunt u zich eerst concentreren op de CT-waarde, wat relatief intuïtieve experimentele gegevens zijn, en de grootte ervan komt overeen met de grootte van de initiële sjabloonhoeveelheid.Er zijn ook grafieken zoals amplificatiecurven en smeltcurven.Zij hebben het laatste woord over het al dan niet slagen van uw experiment.
W: Oh, broer.Dan ga ik het qPCR-experiment doen!
M: Let er vooral op dat u geen sjablonen toevoegt aan het reagensgebied, anders wordt uw ongebruikte mix gemakkelijk besmet!
W: Begrepen!

Realtime PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Hogere efficiëntie, grotere specificiteit
Hoge gevoeligheid, goede compatibiliteit