• facebook
  • gelinkt
  • youtube

Monduitstrijkje/FTA-kaart DNA-extractiekit

De volgende analyse van mogelijke problemen inBuccaalwattenstaafje/vrijhandelsovereenkomst card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

De zuiveringskolom is verstopt

 

 

In deze kit wordt de zuiveringskolom tijdens de genomische DNA-extractie direct geadsorbeerd op het enzymatische lysismengsel van het monster zonder centrifugatiestap, en de zuiveringskolom kan worden geblokkeerd vanwege onvolledige enzymisatie en hoge viscositeit van het monster.

De volgende mogelijke oorzaken zijn als volgt:

1. Onvolledige enzymatische vertering van weefselmonsters.

Aanbeveling: De monsterverwerkingstijd van Foregene Protease kan op gepaste wijze worden verlengd of het supernatant kan worden genomen na centrifugeren bij 12.000 rpm (~13.400 tpm).× g) gedurende 5 minuten.

2. Overmatig gebruik van weefselmonsters of grote weefsels.

Aanbeveling: Het is het beste om niet hoger te zijn dan 1Buccaal uitstrijkje in het monster;als het monster te groot is, verhoog dan de dosering van Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 dienovereenkomstig.

3. De viscositeit van het monster is te hoog.

Aanbeveling: Monsters kunnen op de juiste manier worden verdund met 10 mM Tris-HCl vóór extractie van genomisch DNA.

4. Fragmenten van de bloedkaart zijn opgezogen.

Aanbeveling: De tijdelijke centrifugatietijd van stap 6 van bloedvlek (FTA Card) genomische extractie kan op passende wijze worden verlengd.

 

Lage opbrengst of geen DNA

 

Er zijn vaak verschillende factoren die de opbrengst van genomisch DNA beïnvloeden, waaronder de oorsprong van het monster, de opslagomstandigheden van het monster, de voorbereiding van het monster, manipulatie, enz.

Genomisch DNA kan niet worden verkregen tijdens extractie

De mogelijke oorzaken zijn als volgt:

1. Onjuiste bewaring van monsters of te lange opslag leidt tot afbraak van genomisch DNA.

Aanbeveling: Orale uitstrijkjes moeten bij voorkeur vers worden afgenomen en het is niet raadzaam geconserveerde uitstrijkjes te gebruiken voor genomische DNA-extractie;bloedvlekmonsters moeten ervoor zorgen dat de kwaliteit gekwalificeerd is en de bewaartijd mag niet te lang zijn.

2. Te weinig weefselgebruik kan ertoe leiden dat het corresponderende genomische DNA niet wordt geëxtraheerd.

Aanbeveling: Volg debuccal instructies voor het afnemen van uitstrijkjes in de bedieningshandleiding en veeg zo vaak mogelijk af zodat er voldoende cellen aan het uitstrijkje kunnen worden gehecht voor genomische DNA-extractie;voor extractie van bloedvlekkenmonsters kan het snijgebied voor bloedvlekken op passende wijze worden vergroot.

3. Foregene Protease wordt niet goed bewaard, wat resulteert in een afname van de activiteit of inactivering.

Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities vande Foregene Protease of vervang het door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische reactie.

4. Onjuiste bewaring van de kit of opslagtijd is te lang, wat resulteert in het defect raken van sommige componenten in de kit.

Advies: Koop een nieuweBuccaal uitstrijkje DNAisolatie kit voor gerelateerde procedures.

5. Buffer WB voegt geen absolute ethanol toe.

Aanbeveling: Bevestig dat buffer WB het juiste volume absolute ethanol toevoegt.

6. Het eluens is niet correct toegevoegd aan de siliconenfilm.

Aanbeveling: voeg 65 toe° Cvoorverwarmd eluens daalt naar het midden van het siliconenmembraan en laat het 5 minuten bij kamertemperatuur staan ​​om de elutie-efficiëntie te verhogen.

Lgenomisch DNA met een hoge opbrengst geïsoleerd

De volgende mogelijke oorzaken zijn als volgt:

1. Onjuiste bewaring van monsters of te lange opslag leidt tot afbraak van genomisch DNA.

Aanbeveling: Orale uitstrijkjes worden bij voorkeur vers afgenomen en geconserveerde uitstrijkjes mogen niet worden gebruikt voor genomische DNA-extractie.

2. Als de hoeveelheid weefselmonster te klein is, zal het geëxtraheerde genomische DNA-gehalte lager zijn.

Aanbeveling: Volg de instructies voor het afnemen van een uitstrijkje in de gebruiksaanwijzing en veeg zo vaak mogelijk af zodat er voldoende cellen aan het uitstrijkje kunnen worden gehecht voor genomische DNA-extractie.

3. Foregene Protease wordt niet goed bewaard, wat resulteert in een afname van de activiteit of inactivering.

Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities vanthe Foregene Protease of vervang het door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische reactie.

4. Problemen met eluens.

Aanbeveling: gebruik Buffer EB voor elutie;bij gebruik van ddH2O of andere eluenten, bevestig dat de pH van het eluaat tussen 7,0-8,5 ligt.

5. Het eluaat is niet correct druppelsgewijs toegevoegd.

Aanbeveling: voeg eluensdruppels toe aan het midden van het siliconenmembraan en laat 5 minuten bij kamertemperatuur staan ​​om de elutie-efficiëntie te verhogen.

6. De elutievloeistof hoopt zich te weinig op.

Aanbeveling: Gebruik ten minste eluens voor genomische DNA-elutie zoals vereist in de instructiesniet minder dan 15μl.

Low zuiverheid of genomisch DNAgeïsoleerd

Lage genomische DNA-zuiverheid kan leiden tot mislukking of onbevredigende resultaten van downstream-experimenten, zoals: enzymen kunnen niet worden opengesneden, PCR kan het genfragment van belang niet krijgen, enz.

De mogelijke oorzaken zijn als volgt:

1. Heteroproteïne vervuiling, RNA vervuiling.

Analyse: De zuiveringskolom werd niet gewassen met Buffer PW;de Buffer PW-waszuiveringskolom werd niet gewassen met de juiste centrifugaalsnelheid.

Aanbeveling: Zorg ervoor dat er geen neerslag in het supernatant is voordat u ethanol toevoegt;zorg ervoor dat u de zuiveringskolom wast volgens de instructies, en deze stap kan niet worden overgeslagen.

2. Verontreiniging door onzuiverheden door ionen.

Analyse: Buffer WB waszuiveringskolom werd weggelaten of slechts één keer gewassen, resulterend in resterende ionische verontreiniging.

Aanbeveling: Zorg ervoor dat u Buffer WB 2 keer wast zoals aangegeven om resterende ionen zoveel mogelijk te verwijderen.

3. RNA-enzymverontreiniging.

Analyse: Vreemde RNases werden aan de buffer toegevoegd;Buffer PW-wasbewerking was onjuist, resulterend in RNase-residuen, die stroomafwaartse RNA-experimentele bewerkingen, zoals in vitro transcriptie, beïnvloedden.

Aanbeveling: Foregene serie nucleïnezuurgeïsoleerdDeze kits kunnen RNA verwijderen zonder extra toevoeging van RNase,dus Buccaal wattenstaafje/FTA-kaart DNA-isolatiekitnodig't voeg RNase toe;zorg ervoor dat u de instructies voor de Buffer PW-waszuiveringskolom volgt, en deze stap kan niet worden weggelaten.

4. Ethanolresten.

Analyse: Buffer WB voerde geen centrifugering met lege buis uit na het wassen van de zuiveringskolom.

Aanbeveling: voer de juiste lege buiscentrifugering uit volgens de instructies.

5. Andere onzuiverheidsverontreiniging.

Analyse: Bewaarde monsters of speciale monsters worden niet voorbehandeld.

Aanbeveling: Behandel het monster grondig volgens de instructies.

 


Posttijd: 18 maart 2022