• facebook
  • gelinkt
  • youtube

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

Veelgestelde vragen voorAnimal Total RNA-isolatiekit

De volgende analyse van de problemen die u kunt tegenkomenRNA-extractie van dierlijk weefsel/cel will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA wordt niet geëxtraheerd of de RNA-opbrengsten zijn laag

Er zijn vaak verschillende factoren die de herstelefficiëntie beïnvloeden, zoals: RNA-gehalte van weefselmonster, werkwijze, elutievolume, enz.

1. IJsbad of cryogene (4 °C) centrifugatie werd uitgevoerd tijdens bedrijf.

Aanbeveling: Gedurende het hele proces bij kamertemperatuur (15-25°C) werken, geen ijsbad nemen en centrifugeren bij lage temperaturen.

2. Onjuiste bewaring van het monster of te lange bewaartijd van het monster.

Aanbeveling: bewaar monsters bij -80 °C of vries ze in vloeibare stikstof in en vermijd herhaald gebruik door vriezen en ontdooien;probeer vers weefsel of gekweekte cellen te gebruiken voor RNA-extractie.

3. Onvoldoende monsterlysis.

Aanbeveling: Zorg er bij het homogeniseren van weefsel voor dat het weefsel voldoende gehomogeniseerd is en dat de weefselcellen voldoende gespleten zijn om het vrijkomen van RNA te verklaren.

4. Het eluens is niet correct toegevoegd.

Aanbeveling: Bevestig dat RNase-Free ddH2O wordt druppelsgewijs toegevoegd aan het midden van het zuiveringskolommembraan.

5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan buffer RL2 of buffer RW2.

Aanbeveling: Volg de instructies, voeg de juiste hoeveelheid absolute ethanol toe aan Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat u de kit gebruikt.

6. De dosering van weefselmonsters is niet geschikt.

Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106cellen per 500 μl buffer RL1, omdat overmatig weefselgebruik kan leiden tot verminderde RNA-extractie.

7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.

Aanbeveling: Het elutievolume van de zuiveringskolom is 50-200 μl;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de plaatsingstijd bij kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmd RNase-Free ddH2O, bijv. gedurende 5-10 min.

8. De zuiveringskolom bevat ethanolresidu na wassen met Buffer RW2.

Aanbeveling: Als er ethanolresidu is na het wassen van Buffer RW2, centrifugeren met lege buis gedurende 1 minuut, kan de tijd voor het centrifugeren met lege buis worden verhoogd tot 2 minuten, of de zuiveringskolom kan gedurende 5 minuten op kamertemperatuur worden geplaatst om de resterende ethanol adequaat te verwijderen.

Gezuiverd RNA wordt afgebroken

De kwaliteit van het gezuiverde RNA is gerelateerd aan factoren zoals het behoud van het monster, RNase-besmetting en manipulatie, enz.

1. Weefselmonsters worden niet tijdig bewaard.

Aanbeveling: Als weefselmonsters of cellen na afname niet tijdig worden gebruikt, onmiddellijk cryopreserveren bij -80 °C of vloeibare stikstof.Gebruik waar mogelijk een nieuw genomen weefsel- of celmonster om RNA te extraheren.

2. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van weefselmonsters.

Aanbeveling: Bij het bewaren van weefselmonsters kunt u ze het beste in kleine stukjes snijden om ze te bewaren, en een van de stukjes verwijderen wanneer u ze gebruikt om herhaaldelijk bevriezen en ontdooien van het monster en de afbraak van RNA te voorkomen.

3. RNase wordt geïntroduceerd of het dragen van wegwerphandschoenen, maskers, etc. tijdens de operatie.

Aanbeveling: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in aparte RNA-manipulatiekamers en de tafel wordt voor het experiment afgeruimd.

Draag tijdens het experiment wegwerphandschoenen en -maskers om de RNA-afbraak veroorzaakt door de introductie van RNase te minimaliseren.

4. Reagentia zijn tijdens gebruik verontreinigd met RNase.

Aanbeveling: Vervang door een nieuwe Animal Total RNA Isolation Kit voor gerelateerde experimenten.

5. De centrifugebuisjes, tips enz. die bij RNA-manipulatie worden gebruikt, zijn verontreinigd met RNase.

Aanbeveling: Bevestig dat de centrifugebuisjes, tips, pipetten enz. die worden gebruikt bij RNA-extractie allemaal RNase-vrij zijn.

Gezuiverd verkregen RNA beïnvloedt stroomafwaartse experimenten

RNA gezuiverd door de zuiveringskolom, als de zoutionen, het eiwitgehalte te groot is, zal dit het stroomafwaartse experiment beïnvloeden, zoals: omgekeerde transcriptie, Northern Blot et al.

1. Het geëlueerde RNA heeft zoutionresiduen.

Aanbeveling: Bevestig dat het juiste volume ethanol is toegevoegd aan Buffer RW2 en voer 2 zuiveringskolomwassingen uit met de centrifugaalsnelheid die is aangegeven voor gebruik;als er zoutionresidu is, laat u de zuiveringskolom gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur bufferen met RW2 en voert u centrifugeren uit om de verwijdering van zoutverontreiniging te maximaliseren.

2. Ethanolresidu in geëlueerd RNA.

Aanbeveling: Bevestig dat na het wassen van de buffer RW2, de centrifugeerbewerking met de lege buis wordt uitgevoerd met de aangegeven centrifugeersnelheid, verhoog de tijd van de centrifugeerbewerking met de lege buis tot 2 minuten als er nog ethanolresten zijn, of laat deze gedurende 5 minuten op kamertemperatuur staan ​​na de lege buiscentrifuge om de verwijdering van ethanolresidu te maximaliseren.

Isolatie van soorten nucleïnezuurmonsters

De RNA-isolatiekits van Foregene kunnen totale RNA-isolatie/-extractie verkrijgen uit de volgende monsterbronnen: dierlijk weefsel, planten, cellen, virussen, bloed, enz.

Hoe bewaar ik de kit

Opslag op kamertemperatuur gedurende 24 maanden.


Posttijd: 01-03-2022