RNase is een gevoelig woord dat veel studenten die vaak RNA-extractie-experimenten uitvoeren, niet willen horen.Volledig bewapend werd het RNA dat uiteindelijk werd geëxtraheerd met de zeer giftige reagentia fenol en chloroform, afgebroken.Ik ben niet verzoend!!!Laten we vandaag eens kijken naar de oorsprong van de beroemde Rnase.

Ribonuclease (RNase), of RNase, is een nuclease dat RNA kan hydrolyseren tot kleine moleculen.RNase is als een eiwit met een klein molecuul ongewoon stabiel .Conventionele stoomsterilisatie bij hoge temperatuur en hoge druk en eiwitremmers kunnen het niet volledig inactiveren.De stabiliteit van RNase komt voornamelijk van de disulfidebindingen in de structuur.De veelgebruikte RNase van runderpancreas heeft bijvoorbeeld slechts 124 aminozuren, maar bevat 4 disulfidebindingen.Zwavelbinding en disulfidebinding geven RNase een uitstekende thermische stabiliteit.Bovendien heeft rnase een relatief laag molecuulgewicht en kan het in veel gevallen snel zijn oorspronkelijke conformatie herstellen.

Naast extreem stabiel,RNases zijn alomtegenwoordig in het laboratorium .RNase is een biologisch verdedigingsmechanisme.Voor een cel is exogeen RNA vaak dodelijk.In vergelijking met exogeen DNA is exogeen RNA vaak gevaarlijker.RNA wordt gelukkig getranscribeerd en vertaald, dus bijna alle organismen hebben RNases ontwikkeld om zich te verdedigen tegen de invasie van exogeen RNA.Daarom ademen de bacteriecellen die in het laboratorium worden gekweekt en jij die RNA extraheert, het aroma van RNase uit.Menselijke lichaamsvloeistoffen (speeksel, tranen, enz.) bevatten een grote hoeveelheid RNase, dus huil niet wanneer RNA wordt afgebroken.Hoe meer je huilt, hoe erger de RNA-afbraak!!Zuster Daiyu is niet geschikt voor RNA-extractie!

Daarnaast bevat je tere huid ook veel RNase en ook de stiften, pipetten, koelkastdeurtjes en deurklinken die door de huid zijn aangeraakt, bevatten RNase.

Laten we, met zoveel geklets, eens kijken hoe we met RNases moeten omgaan.

Het eerste waar iedereen aan denkt bij het verwijderen van RNA isDEPC(diethylpyrocarbonaat).DEPC denatureert voornamelijk het eiwit door te combineren met de imidazoolring van de RNase-actieve groep histidine, waardoor de activiteit van het enzym wordt geremd.0,1% DEPC kan een beter verwijderingseffect hebben op Rnase, maar we moeten er rekening mee houden dat DEPC een bekend carcinogeen is, dus speciale aandacht moet worden besteed aan het gebruik ervan.

Voor RNase moeten we uitgaan van twee aspecten,de eerste is om de activiteit van endogene RNase te remmen

Conventionele RNA-extractiereagentia zoals guanidine-isothiocyanaat en DTT in Trizol kunnen de disulfidebinding van RNase openen, maar er zijn nog steeds enkele RNases, vooral in weefselmonsters, dus let op lage temperaturen.

1.Dompel het weefselmonster onmiddellijk onder in vloeibare stikstof nadat u het eruit hebt gehaald, of in een commerciële RNA-conserveringsoplossing.

2.Nadat het RNA van het celmonster is geëxtraheerd, voegt u het toe aan de lysisoplossing en lyseert u het op de ijsbox

3. Voor het malen kunt u het beste vloeibare stikstof gebruiken wanneer weefselmonsters worden gehomogeniseerd.Let bij gebruik van een elektrische homogenisator zonder vloeibare stikstof op het volledig voorkoelen van de homogenaatadapter.

De tweede is exogeen DNase

1.Wees volledig bewapend, draag een laboratoriumjas, draag een masker en draag zeker een paar nieuwe handschoenen (wees niet zo zuinig!! Opgemerkt moet worden dat Trizol super corrosief is, en het is ook erg sterk door handschoenen heen, dus druppel niet op je handen).

2.Alle gebruikte pipetpunten, EP-buisjes, PCR-buisjes en andere apparatuur moeten de-RNase-behandeld zijn.Het kan worden gedrenkt in 0,1% DEPC en vervolgens onder hoge druk onder druk worden gezet.Let op de werking in een zuurkast.Lokale tirannen kunnen direct verbruiksartikelen kopen voor het verwijderen van enzymen.

PS: Laat me je een luie methode vertellen.Hoewel hoge temperatuur en hoge druk RNase niet volledig kunnen verwijderen, zal het een groot deel ervan verwijderen.2 keer hoge temperatuur en hoge druk heeft een goed effect en de extractie van RNA heeft weinig effect.

3.Alcohol kan eiwitten denatureren,zodat de RNA-extractietafel kan worden afgeveegd met 75% alcohol , en handschoenen kunnen ook met alcohol worden besproeid.

4.De uiteindelijke oplossing voor het oplossen van RNA en de centrifugebuis moeten ook worden behandeld met de-RNase.DEPC-water is een veelgebruikte oplossing voor het oplossen van RNA.Laten we het hebben over de juiste bereidingswijze van DEPC-water (vergeet niet om de commerciële DEPC opnieuw te verpakken wanneer u deze koopt)

Voeg DEPC toe aan ultrapuur water in een verhouding van 1:1000, schud goed, laat een nacht staan ​​bij 37°C en steriliseer bij 121°C onder hoge temperatuur en hoge druk gedurende 15 minuten.DEPC-water kan worden bewaard bij -20°C in aliquots van 1 ml.

Tot slot, om samen te vatten: lage temperatuur is de sleutel, verbruiksartikelen worden goed behandeld, volledig bewapend en minder gepraat!

Nou, dat was het voor de strategie van vandaag.Ik wens je alle RNA-concentratie en zuiverheid toe die je noemde.Zowel de A260 als de A280 zijn 2.0!!!

Natuurlijk, als je eenRNA-extractiekit bij kamertemperatuur, kunt u de bovenstaande problemen niet tegenkomen.

Werking bij kamertemperatuur, zonder toevoeging van DNase, extraheert totaal RNA uit cellen in 11 minuten en extraheert totaal RNA uit dierlijke weefsels of planten in 30 minuten.

Voor proefmonsters kunt u contact opnemen met:overseas@foregene.com

Gerelateerde producten:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/