• facebook
  • gelinkt
  • youtube

Antilichamen, ook wel immunoglobulinen (Ig) genoemd, zijn glycoproteïnen die zich specifiek binden aan antigenen.
 
Conventionele antilichaambereiding wordt geproduceerd door dieren te immuniseren en antiserum te verzamelen.Daarom bevat antiserum gewoonlijk antilichamen tegen andere niet-verwante antigenen en andere eiwitcomponenten in het serum.Algemene antigeenmoleculen bevatten meestal meerdere verschillende epitopen, dus conventionele antilichamen zijn ook een mengsel van antilichamen tegen meerdere verschillende epitopen.Zelfs de conventionele serumantilichamen gericht tegen hetzelfde epitoop zijn nog steeds samengesteld uit heterogene antilichamen geproduceerd door verschillende B-celklonen.Daarom worden conventionele serumantilichamen ook wel polyklonale antilichamen of kortweg polyklonale antilichamen genoemd.
 
Monoklonaal antilichaam (monoklonaal antilichaam) is een zeer uniform antilichaam geproduceerd door een enkele B-celkloon en alleen gericht tegen een specifiek epitoop.Het wordt meestal bereid met hybridoma-technologie - hybridoma-antilichaamtechnologie is gebaseerd op celfusietechnologie, waarbij B-cellen worden gecombineerd met het vermogen om specifieke antilichamen en myeloomcellen met oneindige groeicapaciteit uit te scheiden in B-celhybridoma's.Deze hybridoomcel heeft de kenmerken van een oudercel.Het kan zich voor onbepaalde tijd en onsterfelijk in vitro vermenigvuldigen, zoals myeloomcellen, en het kan specifieke antilichamen synthetiseren en afscheiden, zoals miltlymfocyten.Door middel van klonen kan een monoklonale lijn worden verkregen die is afgeleid van een enkele hybridomacel, dat wil zeggen een hybridomacellijn.De antilichamen die het produceert, zijn zeer homogene antilichamen tegen dezelfde antigene determinant, dat wil zeggen monoklonale antilichamen.
 
Antilichamen bestaan ​​als een of meer Y-vormige monomeren (dwz monoklonale antilichamen of polyklonale antilichamen).Elk Y-vormig monomeer is samengesteld uit 4 polypeptideketens, waaronder twee identieke zware ketens en twee identieke lichte ketens.Lichte keten en zware keten worden genoemd naar hun molecuulgewicht.De bovenkant van de Y-vormige structuur is het variabele gebied, de antigeenbindingsplaats.(Uittreksel uit Detai Bio-monoklonaal antilichaamconcept)
 
Antilichaam structuur
1Zware ketting
Er zijn vijf soorten Ig-zware ketens van zoogdieren, genoemd met de Griekse letters α, δ, ε, γ en μ.De overeenkomstige antilichamen worden IgA, IgD, IgE, IgG en IgM genoemd.Verschillende zware kettingen verschillen in grootte en samenstelling.α en γ bevatten ongeveer 450 aminozuren, terwijl μ en ε ongeveer 550 aminozuren bevatten.
Elke zware keten heeft twee regio's: de constante regio en de variabele regio.Alle antilichamen van hetzelfde type hebben hetzelfde constante gebied, maar er zijn verschillen tussen antilichamen van verschillende typen.De constante gebieden van de zware ketens γ, α en δ zijn samengesteld uit drie Ig-domeinen achter elkaar, met een scharniergebied om de flexibiliteit te vergroten;de constante gebieden van de zware ketens μ en ε zijn samengesteld uit 4 Ig-domeinen.Het variabele gebied van de zware keten van het antilichaam geproduceerd door verschillende B-cellen is verschillend, maar het variabele gebied van het antilichaam geproduceerd door dezelfde B-cel of celkloon is hetzelfde, en het variabele gebied van elke zware keten is ongeveer 110 aminozuren lang., En vormen een enkel Ig-domein.
 
Licht ketting
Er zijn slechts twee soorten lichte ketens bij zoogdieren: het lambda-type en het kappa-type.Elke lichte keten heeft twee gekoppelde domeinen: een constant gebied en een variabel gebied.De lengte van de lichte keten is ongeveer 211~217 aminozuren.De twee lichte ketens in elk antilichaam zijn altijd hetzelfde.Voor zoogdieren heeft de lichte keten in elk antilichaam slechts één type: kappa of lambda.Bij sommige lagere gewervelde dieren, zoals kraakbeenvissen (kraakbeenvissen) en beenvissen, worden ook andere soorten lichte ketens zoals het iota (iota) type aangetroffen.
 
Fab- en Fc-segmenten
Het Fc-segment kan direct worden gecombineerd met enzymen of fluorescerende kleurstoffen om antilichamen te labelen.Het is het deel waar het antilichaam op de plaat vastklinkt tijdens het ELISA-proces, en het is ook het deel waar het tweede antilichaam wordt herkend en gebonden in immunoprecipitatie, immunoblotting en immunohistochemie.Antilichamen kunnen worden gehydrolyseerd tot twee F(ab)-segmenten en één Fc-segment door proteolytische enzymen zoals papaïne, of ze kunnen uit het scharniergebied worden gebroken door pepsine en worden gehydrolyseerd tot één F(ab)2-segment en één Fc-segment.IgG-antilichaamfragmenten zijn soms erg nuttig.Vanwege het ontbreken van het Fc-segment zal het F(ab)-segment niet neerslaan met het antigeen, noch zal het worden ingevangen door immuuncellen in in vivo studies.Vanwege de kleine moleculaire fragmenten en het ontbreken van een verknopingsfunctie (vanwege het ontbreken van een Fc-segment), wordt het Fab-segment meestal gebruikt voor radiolabeling in functionele studies en wordt het Fc-segment voornamelijk gebruikt als een blokkeringsmiddel bij histochemische kleuring.
 
Variabele en constante regio's
Het variabele gebied (V-regio) bevindt zich op 1/5 of 1/4 (bevat ongeveer 118 aminozuurresiduen) van de H-keten nabij de N-terminus en 1/2 (bevat ongeveer 108-111 aminozuurresiduen) nabij de N-terminus van de L-keten.Elke V-regio heeft een peptidering gevormd door disulfidebindingen binnen de keten, en elke peptidering bevat ongeveer 67 tot 75 aminozuurresiduen.De samenstelling en rangschikking van aminozuren in het V-gebied bepalen de antigeenbindingsspecificiteit van het antilichaam.Vanwege de steeds veranderende typen en volgorde van aminozuren in het V-gebied, kunnen vele soorten antilichamen met verschillende bindende antigeenspecificiteiten worden gevormd.De V-regio's van de L-keten en H-keten worden respectievelijk VL en VH genoemd.In VL en VH hebben de aminozuursamenstelling en sequentie van sommige lokale regio's een hogere mate van variatie.Deze regio's worden hypervariabele regio's (HVR) genoemd.De aminozuursamenstelling en rangschikking van de niet-HVR-delen in het V-gebied zijn relatief conservatief, wat het raamwerkgebied wordt genoemd.Er zijn drie hypervariabele gebieden in VL, gewoonlijk gelokaliseerd op respectievelijk aminozuurresten 24 tot 34 en 89 tot 97.De drie HVR's van VL en VH worden respectievelijk HVR1, HVR2 en HVR3 genoemd.Het onderzoek en de analyse van röntgenkristaldiffractie hebben aangetoond dat het hypervariabele gebied inderdaad de plaats is waar het antilichaamantigeen bindt, daarom wordt het het complementariteitsbepalende gebied (CDR) genoemd.De HVR1, HVR2 en HVR3 van VL en VH kunnen respectievelijk CDR1, CDR2 en CDR3 worden genoemd.Over het algemeen heeft CDR3 een hogere mate van hypervariabiliteit.Het hypervariabele gebied is ook de belangrijkste locatie waar de idiotypische determinanten van Ig-moleculen voorkomen.In de meeste gevallen speelt de H-keten een belangrijkere rol bij de binding aan het antigeen.
2Het constante gebied (C-gebied)bevindt zich op 3/4 of 4/5 (ongeveer van aminozuur 119 tot het C-uiteinde) van de H-keten nabij het C-uiteinde en 1/2 (bevat ongeveer 105 aminozuurresten) nabij het C-uiteinde van de L-keten.Elk functioneel gebied van de H-keten bevat ongeveer 110 aminozuurresiduen en bevat een peptidering die is samengesteld uit 50-60 aminozuurresiduen verbonden door disulfidebindingen.De aminozuursamenstelling en rangschikking van dit gebied zijn relatief constant in dezelfde dierlijke Ig isotype L-keten en dezelfde type H-keten.Hetzelfde, het kan alleen specifiek binden aan het overeenkomstige antigeen, maar de structuur van zijn C-regio is hetzelfde, dat wil zeggen, het heeft dezelfde antigeniciteit.Het paard anti-humaan IgG secundair antilichaam (of anti-antilichaam) kan worden gecombineerd met de twee Een combinatie van antilichamen (IgG) tegen verschillende exotoxinen komt voor.Dit is een belangrijke basis voor het bereiden van secundaire antilichamen en het aanbrengen van fluoresceïne, isotopen, enzymen en andere gelabelde antilichamen.
 
 
Gerelateerde producten:
Cell Direct RT-qPCR-kit

 

 


Posttijd: 30 sept.2021