Buccale uitstrijkje/FTA-kaart DNA-isolatiekit Genomische DNA-extractie of zuiveringskit van buccale uitstrijkjes
Kitbeschrijving:
Zuiver snel hoogwaardig genomisch DNA uit buccale uitstrijkjes/FTA-kaartmonsters.
◮Geen RNase-besmetting:De kolom met alleen DNA die door de kit wordt geleverd, maakt het mogelijk om het RNA uit het genomische DNA te verwijderen zonder RNase toe te voegen tijdens het experiment, waardoor wordt voorkomen dat het laboratorium wordt besmet met exogeen RNase.
◮Hoge snelheid:Foregene Protease heeft een hogere activiteit dan vergelijkbare proteasen en verteert weefselmonsters snel;de operatie is eenvoudig en de genomische DNA-extractie kan binnen 20-80 minuten worden voltooid.
◮Handig:De centrifugatie wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur en er is geen noodzaak voor 4°C lage temperatuur centrifugatie of ethanolprecipitatie van DNA.
◮Veiligheid:Er is geen organische reagensextractie vereist.
◮Hoge kwaliteit:Het geëxtraheerde genomische DNA heeft grote fragmenten, geen RNA, geen RNase en een extreem laag ionengehalte, dat kan voldoen aan de vereisten van verschillende experimenten.
◮Micro-elutiesysteem:Het kan de concentratie van genomisch DNA verhogen, wat handig is voor stroomafwaartse detectie of experimenten.
Beschrijving
Deze kit biedt een efficiënte en snelle methode om hooggeconcentreerd genomisch DNA te verkrijgen uit buccale uitstrijkjes en FTA Card (bloedspots).Ons bedrijf gebruiken's unieke silicamembraan-spinkolom en -formule met alleen DNA, gecombineerd met Foregene Protease, kan hooggeconcentreerd, hoogwaardig genomisch DNA in 80 minuten worden geëxtraheerd.De speciaal ontworpen kleine zuiveringskolom bindt genomisch DNA en het DNA kan met een kleine hoeveelheid worden geëlueerd (15μl) elutiesysteem om de concentratie van het verkregen genomische DNA te verhogen, wat handig is voor stroomafwaartse detectie of experiment.De kit kan een of meer monsters tegelijk verwerken en het zuiveringsproces vereist geen extractie van organische stoffen zoals fenol, chloroform en tijdrovende isopropanol- of ethanolprecipitatie, en de bediening is eenvoudig en tijdbesparend.
Specificaties
50 voorbereidingen
Kit-componenten
| buffer ST1 |
| buffer ST2 |
| Lineair acrylamide |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene protease |
| Kolom met alleen DNA |
| Instructies |
Kenmerken&voordelen
-Geen RNase-besmetting: de kolom met alleen DNA die door de kit wordt geleverd, maakt het mogelijk om RNA uit genomisch DNA te verwijderen zonder RNase toe te voegen tijdens het experiment, waardoor wordt voorkomen dat het laboratorium wordt besmet met exogeen RNase.
-Hoge snelheid: Foregene Protease heeft een hogere activiteit dan vergelijkbare proteasen, verteert monsters snel;eenvoudige bediening.
-Handig: de centrifugatie wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur en er is geen noodzaak voor 4°C lage temperatuur centrifugatie of ethanolprecipitatie van DNA.
-Veiligheid: Er is geen organische reagensextractie vereist.
-Hoge kwaliteit: het geëxtraheerde genomische DNA heeft grote fragmenten, geen RNA, geen RNase en een extreem laag ionengehalte, dat kan voldoen aan de vereisten van verschillende experimenten.
-Micro-elutiesysteem: het kan de concentratie van genomisch DNA verhogen, wat handig is voor stroomafwaartse detectie of experiment.
Kit-applicatie
Het is geschikt voor de zuivering van genomisch DNA uit de volgende monsters: buccale uitstrijkjes, FTA Card (bloedvlekken).
Opslag en houdbaarheid
-Deze kit is 12 maanden houdbaar onder droge omstandigheden bij kamertemperatuur (15-25°C);als het voor langere tijd moet worden bewaard, kan het worden bewaard bij 2-8°C.
Opmerking: indien bewaard bij lage temperatuur, is de oplossing gevoelig voor neerslag.Zorg ervoor dat u de oplossing voor gebruik een tijdje op kamertemperatuur in de kit bewaart.Indien nodig, verwarm het gedurende 10 minuten in een waterbad van 37°C om het neerslag op te lossen en meng het voor gebruik.
-Foregene Protease-oplossing heeft een unieke formule, die actief is bij langdurige opslag bij kamertemperatuur (3 maanden);zijn activiteit en stabiliteit zullen beter zijn bij bewaring bij 4°C, dus het wordt aanbevolen om het bij 4°C te bewaren, vergeet niet om het bij -20°C te bewaren.
De zuiveringskolom is verstopt
In deze kit wordt de zuiveringskolom tijdens de genomische DNA-extractie direct geadsorbeerd op het enzymatische lysismengsel van het monster zonder centrifugatiestap, en de zuiveringskolom kan worden geblokkeerd vanwege onvolledige enzymisatie en hoge viscositeit van het monster.
De volgende mogelijke oorzaken zijn als volgt:
1. Onvolledige enzymatische vertering van weefselmonsters.
Aanbeveling: de monsterverwerkingstijd van Foregene Protease kan op passende wijze worden verlengd of het supernatant kan worden afgenomen na 5 minuten centrifugeren bij 12.000 rpm (~13.400 × g).
2. Overmatig gebruik van weefselmonsters of grote weefsels.
Aanbeveling: Het is het beste om niet meer dan 1 Buccaal uitstrijkje in het monster te nemen;als het monster te groot is, verhoog dan de dosering van Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 dienovereenkomstig.
3. De viscositeit van het monster is te hoog.
Aanbeveling: Monsters kunnen op de juiste manier worden verdund met 10 mM Tris-HCl vóór extractie van genomisch DNA.
4. Fragmenten van de bloedkaart zijn opgezogen.
Aanbeveling: De tijdelijke centrifugatietijd van stap 6 van bloedvlek (FTA Card) genomische extractie kan op passende wijze worden verlengd.
Lage opbrengst of geen DNA
Er zijn vaak verschillende factoren die de opbrengst van genomisch DNA beïnvloeden, waaronder de oorsprong van het monster, de opslagomstandigheden van het monster, de voorbereiding van het monster, manipulatie, enz.
Genomisch DNA kan niet worden verkregen tijdens extractie
De mogelijke oorzaken zijn als volgt:
1. Onjuiste bewaring van monsters of te lange opslag leidt tot afbraak van genomisch DNA.
Aanbeveling: Orale uitstrijkjes moeten bij voorkeur vers worden afgenomen en het is niet raadzaam geconserveerde uitstrijkjes te gebruiken voor genomische DNA-extractie;bloedvlekmonsters moeten ervoor zorgen dat de kwaliteit gekwalificeerd is en de bewaartijd mag niet te lang zijn.
2. Te weinig weefselgebruik kan ertoe leiden dat het corresponderende genomische DNA niet wordt geëxtraheerd.
Aanbeveling: volg de instructies voor het afnemen van een monduitstrijkje in de bedieningshandleiding en veeg zo vaak mogelijk af zodat er voldoende cellen aan het monduitstrijkje kunnen worden gehecht voor genomische DNA-extractie;voor extractie van bloedvlekkenmonsters kan het snijgebied voor bloedvlekken op passende wijze worden vergroot.
3. Foregene Protease wordt niet goed bewaard, wat resulteert in een afname van de activiteit of inactivering.
Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities van de Foregene Protease of vervang deze door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische reactie.
4. Onjuiste bewaring van de kit of opslagtijd is te lang, wat resulteert in het defect raken van sommige componenten in de kit.
Aanbeveling: Schaf een nieuwe Buccale uitstrijkje DNA-isolatiekit aan voor gerelateerde procedures.
5. Buffer WB voegt geen absolute ethanol toe.
Aanbeveling: Bevestig dat buffer WB het juiste volume absolute ethanol toevoegt.
6. Het eluens is niet correct toegevoegd aan de siliconenfilm.
Aanbeveling: voeg voorverwarmde eluensdruppels van 65 °C toe aan het midden van het siliconenmembraan en laat het 5 minuten bij kamertemperatuur staan om de elutie-efficiëntie te verhogen.
Laagproductief genomisch DNA geïsoleerd
De volgende mogelijke oorzaken zijn als volgt:
1. Onjuiste bewaring van monsters of te lange opslag leidt tot afbraak van genomisch DNA.
Aanbeveling: Orale uitstrijkjes worden bij voorkeur vers afgenomen en geconserveerde uitstrijkjes mogen niet worden gebruikt voor genomische DNA-extractie.
2. Als de hoeveelheid weefselmonster te klein is, zal het geëxtraheerde genomische DNA-gehalte lager zijn.
Aanbeveling: Volg de instructies voor het afnemen van een uitstrijkje in de gebruiksaanwijzing en veeg zo vaak mogelijk af zodat er voldoende cellen aan het uitstrijkje kunnen worden gehecht voor genomische DNA-extractie.
3. Foregene Protease wordt niet goed bewaard, wat resulteert in een afname van de activiteit of inactivering.
Aanbeveling: Bevestig de bewaarcondities van de Foregene Protease of vervang deze door een nieuwe Foregene Protease voor enzymatische reactie.
4. Problemen met eluens.
Aanbeveling: gebruik Buffer EB voor elutie;bij gebruik van ddH2O of andere eluenten, bevestig dat de pH van het eluaat tussen 7,0-8,5 ligt.
5. Het eluaat is niet correct druppelsgewijs toegevoegd.
Aanbeveling: voeg eluensdruppels toe aan het midden van het siliconenmembraan en laat 5 minuten bij kamertemperatuur staan om de elutie-efficiëntie te verhogen.
6. De elutievloeistof hoopt zich te weinig op.
Aanbeveling: Gebruik eluens voor genomische DNA-elutie zoals vereist in de instructies, ten minste niet minder dan 15 μl.
Lage zuiverheid van genomisch DNA geïsoleerd
Lage genomische DNA-zuiverheid kan leiden tot mislukking of onbevredigende resultaten van downstream-experimenten, zoals: enzymen kunnen niet worden opengesneden, PCR kan het genfragment van belang niet krijgen, enz.
De mogelijke oorzaken zijn als volgt:
1. Heteroproteïne vervuiling, RNA vervuiling.
Analyse: De zuiveringskolom werd niet gewassen met Buffer PW;de Buffer PW-waszuiveringskolom werd niet gewassen met de juiste centrifugaalsnelheid.
Aanbeveling: Zorg ervoor dat er geen neerslag in het supernatant is voordat u ethanol toevoegt;zorg ervoor dat u de zuiveringskolom wast volgens de instructies, en deze stap kan niet worden overgeslagen.
2. Verontreiniging door onzuiverheden door ionen.
Analyse: Buffer WB waszuiveringskolom werd weggelaten of slechts één keer gewassen, resulterend in resterende ionische verontreiniging.
Aanbeveling: Zorg ervoor dat u Buffer WB 2 keer wast zoals aangegeven om resterende ionen zoveel mogelijk te verwijderen.
3. RNA-enzymverontreiniging.
Analyse: Vreemde RNases werden aan de buffer toegevoegd;Buffer PW-wasbewerking was onjuist, resulterend in RNase-residuen, die stroomafwaartse RNA-experimentele bewerkingen, zoals in vitro transcriptie, beïnvloedden.
Aanbeveling: nucleïnezuurisolatiekits uit de Foregene-serie kunnen RNA verwijderen zonder extra toevoeging van RNase, dus buccale Swab/FTA Card DNA-isolatiekit hoeft geen RNase toe te voegen;zorg ervoor dat u de instructies voor de Buffer PW-waszuiveringskolom volgt, en deze stap kan niet worden weggelaten.
4. Ethanolresten.
Analyse: Buffer WB voerde geen centrifugering met lege buis uit na het wassen van de zuiveringskolom.
Aanbeveling: voer de juiste lege buiscentrifugering uit volgens de instructies.
5. Andere onzuiverheidsverontreiniging.
Analyse: Bewaarde monsters of speciale monsters worden niet voorbehandeld.
Aanbeveling: Behandel het monster grondig volgens de instructies.
